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求助！pMG36e质粒连接目的片段后转入DH5α后红霉素抗性平板长满菌落
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Sample Text 2022年购入一瓶biotopped的红霉素1g并用10mL无水乙醇溶解，0.22μmPES滤膜滤菌，分装后-20保存。去年于LB平板上使用的红霉素浓度为300 μg/mL，此时红霉素具有良好的筛选效果。 由于疫情原因提前回家，2023年1月底返回学校接着做时发现红霉素无法起到筛选阳性克隆的效果，当即更换新的红霉素，用与之前相同的方法进行母液配置及保存，但从现在开始事情不对了——300μg/mL红霉素的LB抗性平板纸上长满了菌，根本无法筛选出阳性克隆，此时我提高抗生素浓度至600ug/mL，空载的E.coli DH5α仍能够肆意生长。 不死心的我更换了酷来博的红霉素进行实验，同样存在E.coli DH5α能够生长的问题。 又看到有帖子讲到：使用乙醇溶解的抗生素可不进行滤菌处理直接使用。又购入一支抗生素，乙醇溶解后直接分装保存。使用发现问题仍未解决。 在此试验期间，加入红霉素时LB琼脂培养基的温度保证不对红霉素活性产生影响，同时也试过降低培养温度、缩短培养时间等操作，但试验依旧失败。 Sample Text试问为什么会遇到这种情况？该如何解决问题？ |
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Glenice Y
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你们感受态是自制?还是购买的?可以首先用感受态涂在含有你这个抗生素的板子上，看看是否长菌，如果长，那么证明这个感受态本身就有问题，此前我们实验室遇到过感受态本身就抗cam，导致于根本筛选不出来。如果确定感受态的问题，就可以从这个方面解决，如果不是，那用一个拥有这个抗性都菌图板试试，长出来的菌是否为你要的，可以提质粒去测序，证明抗生素是否有问题 发自小木虫Android客户端 |
2楼2023-04-25 14:40:07
3楼2024-04-07 09:45:29
4楼2024-04-28 10:44:57