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[交流]
【求助】关于硅胶柱上样的问题
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我用硅胶装好柱子后，用流动相冲后，沉降了一夜 ，要上样了 ，想问问 怎么湿法上样，流动相还在硅胶面以上 ，要怎么把样品加上去 ，直接沿壁加吗，还是把流动相放的刚好和硅胶面接触 再加样 ，还是把流动相都放完了再加样啊 望各位大侠帮帮忙 明天就要加样了 [ Last edited by jw227 on 2009-9-24 at 09:06 ] |
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4楼2009-09-24 08:46:40
user53900
木虫 (正式写手)
知易行难，实验的真谛
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湿法上样
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472514568(金币+2,VIP+0):鼓励回帖 9-23 20:01
xinni_1983(金币+3,VIP+0): 9-25 08:29
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xinni_1983(金币+3,VIP+0): 9-25 08:29
 我说说自己的经验哈～既然你已经把柱子用流动相给饱和了，那就只能选择湿法 上样了，我还是习惯干法上样，通过淋洗，把极性小的，不要的杂质给洗掉先，这样更容易分离提纯，但是湿法上样也并不是不可～！先把你的流动相放至离硅胶1cm这样，然后关闭出液口，用移液管，把你事先溶解好的样品吸入，再沿着柱壁慢慢的，一圈一圈的加入，加到2～3cm 这样，就代开阀门到液面只剩1cm高，再重复刚才的动作3次，这样就可以大量的加入样品，到加完为止，一点经验，不成介意～！ |
2楼2009-09-23 19:52:04
songsong_s
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3楼2009-09-23 20:47:20
★ ★ ★ ★ ★ ★
xinni_1983(金币+5,VIP+0): 9-25 08:30
472514568(金币+1,VIP+0):奖励积极回帖交流！ 10-10 13:22
xinni_1983(金币+5,VIP+0): 9-25 08:30
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有两种方法：溶液加样和拌样加样。 （1）溶液加样法：将样品以适量洗脱剂溶解（样品太浓，加样后使填充剂结块。样品太稀，则加样带太宽，影响分离效果）。迅速将样品液全部加于柱顶，使样品溶液立刻盖满柱顶，待样品近全都吸入填充剂中，加少量洗脱剂，打开柱下口，使洗脱剂近干，再加入少量洗脱剂并加入少量吸附剂，使吸附剂在样品带上面形成一薄层，以保护样品带，在最上面还可以加盖一层滤纸或脱脂棉。小心加入洗脱剂，开始洗脱。 [注】将试样溶于层析时使用的流动相中，再沿色谱管壁缓缓加入。注意勿使吸附剂翻起。 （2）拌样加样法：取适量样品易溶的低沸点溶剂把样品溶解。将3～5倍样品量的填充剂逐渐加入样品溶液中（必须使全部填充剂湿润，若溶液太少可继续加入），拌匀，空气凉干或低温减压抽干（不要加热、以防死吸附），呈粉状，用与装柱同样的方法（干法装柱或湿法装柱）将此含样品粉末加到柱顶上，其它同溶液加样法。拌样加样法中吸附剂的用量应尽量少，但太少加洗脱剂后样品带板结无法洗脱。 【注】将试样溶于适当的溶剂中，与少量吸附剂混匀，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。 |
5楼2009-09-24 18:23:18
