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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 融合蛋白包涵体问题
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stefa

新虫 (小有名气)

[交流] 融合蛋白包涵体问题

我用PGEX表达GST融合蛋白
表达后返现GST融合蛋白形成了包涵体
我想做纯化  接下来该用什么溶解包涵体啊
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1楼 2009-09-23 16:27:04
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
stefa(金币+1,VIP+0): 9-23 16:36
Tris-HCl 和2-8M的尿素，最后调pH8.5左右
其中可加入10-50 mM的巯基乙醇。

另，你这个包涵体怎么形成的哇？
估计是37℃诱导的，
不如试试在15-20摄氏度培养和诱导，这样可溶性就会增加很多的！！！
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2009-09-23 16:31:11
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-9-23 16:31:
Tris-HCl 和2-8M的尿素，最后调pH8.5左右
其中可加入10-50 mM的巯基乙醇。

另，你这个包涵体怎么形成的哇？
估计是37℃诱导的，
不如试试在15-20摄氏度培养和诱导，这样可溶性就会增加很多的！！！

确实是37度诱导的

PS  我是用溶菌酶处理 再反复冻融破胞的
破胞后SDS-PAGE电泳发现目的蛋白还在沉淀中
请问你那有没有具体的包涵体溶解过程和后续的纯化过程啊  谢谢！
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3楼2009-09-23 16:40:07
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
引用回帖:
Originally posted by stefa at 2009-9-23 16:40:

确实是37度诱导的

PS  我是用溶菌酶处理 再反复冻融破胞的
破胞后SDS-PAGE电泳发现目的蛋白还在沉淀中
请问你那有没有具体的包涵体溶解过程和后续的纯化过程啊  谢谢！

大肠杆菌啊！最好破了！
直接冰浴超声啊！

反复的常温的处理，破碎液的蛋白沉淀就会增加！


【请问你那有没有具体的包涵体溶解过程和后续的纯化过程啊  】
这个你得去下载一篇硕士或博士论文，详细地看各种溶液的配置和操作步骤。


我说的那个溶液配方就是最常用的，把包涵体直接放里面，然后低温搅拌或震荡或冰浴超声几下，都可以。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-09-23 16:45:30
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-9-23 16:45:


大肠杆菌啊！最好破了！
直接冰浴超声啊！

反复的常温的处理，破碎液的蛋白沉淀就会增加！


【请问你那有没有具体的包涵体溶解过程和后续的纯化过程啊  】
这个你得去下载一篇硕士或博士论文，详细地 ...

哎 我们实验室没有超声波破碎机啊  只有一个清洗用的超声波
那个Tris的溶度是多少的啊  各个试剂的用量又是怎样的呢
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5楼2009-09-23 16:47:37
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-9-23 16:45:


大肠杆菌啊！最好破了！
直接冰浴超声啊！

反复的常温的处理，破碎液的蛋白沉淀就会增加！


【请问你那有没有具体的包涵体溶解过程和后续的纯化过程啊  】
这个你得去下载一篇硕士或博士论文，详细地 ...

哎 太懒了 文献都不想找了
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6楼2009-09-23 16:50:06
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银杏下

金虫 (小有名气)
可以用18度诱导试试，因为如果用了GST标签还是包涵体的话，那么还是别用这个标签了。
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7楼2009-09-23 17:45:57
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695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-9-23 16:31:
Tris-HCl 和2-8M的尿素，最后调pH8.5左右
其中可加入10-50 mM的巯基乙醇。

另，你这个包涵体怎么形成的哇？
估计是37℃诱导的，
不如试试在15-20摄氏度培养和诱导，这样可溶性就会增加很多的！！！

楼上强大，跟你学学来了
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8楼2009-09-23 19:18:12
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
学生物化工不能这样懒的，小弟！

连最基本的文献都懒得去查，这哪行啊？！！！
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
9楼2009-09-23 19:25:56
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