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抗体交联上荧光后需要加BSA吗？ 已有1人参与
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大家好，我是流式荧光崔工，一个旨在链接与流式荧光相关的朋友，一起赚钱、一起学习、一起工作、一起生活的靓仔。 前面的文章TCEP在抗体交联中是如何还原抗体二硫键的？ 回答了一位老师提的问题。 今天有一个读者赵菲问崔工： 我抗体交联荧光后需要加BSA吗？ 理解赵菲问的这个问题，我们先要理清一些概念和思路。 首先要弄清楚的就是BSA是什么？ — 1 — 那么什么是BSA呢？ BSA，中文叫牛血清白蛋白，是牛血清中的一种球蛋白， 包含607个氨基酸残基，分子量为66.446KDa，等电点为4.7。 BSA是一种使用广泛的保护封闭试剂，在生物化学实验中应用比较广泛。 常用于免疫组织化学 (IHC)、免疫细胞化学 (ICC)、ELISA 以及蛋白质印迹。 用于阻断抗体的非特异性结合。 因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。 加入BSA后，它可能起到“保护”或“载体”作用。 大家应该知道，很多抗体中都是加了BSA的，就是为了保护抗体。 说到这，大家心中已经有答案了吧。 答案就是抗体交联荧光后是需要加BSA的。 — 2 — 既然要加，那如何加入？又加多少呢？ 这里又得先了解BSA得形态。 目前市面上商品化的BSA有两种形态，一种是冻干粉，一种是液体。 如果是冻干粉的，那你根据你标记好抗体的浓度，溶解BSA为你想要的浓度加入标记好的抗体中就可以了。 如果是液体，那相对比较麻烦些，BSA如果是高浓度的，那又相对简单点，因为你稀释成你想要的浓度加入标记好的抗体中就可以了。 但如果你是低浓度的BSA，就会相对复杂点。 比如，你可能需要先用超滤管进行浓缩，浓缩到一定浓度后加入标记好的抗体中。 又比如你可能需要用透析的方法。 还可能用脱盐柱的方法。 但如果你用透析的方法，最后可能还是需要用超滤管进行浓缩，因为透析会稀释你的样本浓度。 最方便的崔工觉得还是用脱盐柱的方法。 具体就是先用BSA去平衡脱盐柱，让脱盐柱中留下BSA。 平衡好柱子后上标记好的抗体样本。 这样用脱盐柱处理后的荧光标记抗体中不仅含了BSA，而且标记好的抗体浓度不会有什么影响。 那具体加多少比较合适呢？ 为了保护蛋白,大家通常是加入0.1%-1%的BSA。 如果是进行WB或其他免疫实验室，大家通常是加入1-5%的BSA会用于制备封闭液。 今天的文章就分享到这，如果今天的文章对您有一点点帮忙或一丝丝的启发，欢迎帮忙点个在看和转发，也可加崔工微信进一步交流沟通。 |
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