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【求助】有关脂质体的问题
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求助各位做脂质体的大侠：我做的脂质体老呈现乳白色，做了好多遍了还是那样。请问是我的磷脂用量少吗？磷脂：胆固醇=2：1，谢谢各位了！ [ Last edited by jw227 on 2009-9-21 at 14:57 ] |
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6楼2010-03-06 20:49:43
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ynmyx(金币+2,VIP+0):给个红包，鼓励回帖交流！！ 9-21 13:59
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做空白脂质体时一般是采用3：1； 实验时有一些时限，温度什么的也要多注意一下； 下面有些相关内容，估计对你会有帮助： 用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂、卵磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。 常用的附加剂为胆固醇。胆固醇也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制得稳定的脂质体，其作用是调节双分子层的流动性，减低脂质体膜的通透性。其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂能改变脂质体表面的电荷性质，从而改变脂质体的包封率、体内外其他参数。 脂质体的制法有多种，根据药物的性质或需要进行选择。 （1）薄膜分散法：这是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。此法优点是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。 （2）注入法：有乙醚注入法和乙醇注入法等。“乙醚注入法”是将磷脂等膜材料溶于乙醚中，在搅拌下慢慢滴于55~65℃含药或不含药的水性介质中，蒸去乙醚，继续搅拌1~2h，即可形成脂质体。 （3）逆相蒸发法：系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，如氯仿中，再按一定比例与含药的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂质体制备，可提高包封率。 （4）冷冻干燥法：适于在水中不稳定药物脂质体的制备。 （5）熔融法：采用此法制备的多相脂质体，其物理稳定性好，可加热灭菌。 相关实验 （一）空白脂质体的制备 1．处方 注射用豆磷脂 0.9g 胆固醇 0.3g 无水乙醇 1~2ml 磷酸盐缓冲液 适量 制成30ml脂质体 2.操作 （1）磷酸盐缓冲液（PBS）的配制：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）0.37g与磷酸二氢钠(NaH2PO4•2H2O)2.0g,加蒸馏水适量,溶解并稀释至1000ml(pPH约为5.7)。 （2）称取处方量磷脂、胆固醇于50ml小烧杯中，加无水乙醇1～2ml，置于65～70℃水浴中，搅拌使溶解，旋转该小烧杯使磷脂的乙醇液在杯壁上成膜，用吸耳球轻吹风，将乙醇挥去。 （3）另取磷酸盐缓冲液30ml于小烧杯中，同置于65～70℃水浴中，保温，待用。 （4）取预热的磷酸盐缓冲液30ml，加至含有磷脂和胆固醇脂质膜的小烧杯中， 65～70℃水浴中搅拌水化10min。随后将小烧杯置于磁力搅拌器上，室温，搅拌30～60min，如果溶液体积减少，可补加水至30ml，混匀，即得。 （5）取样，在油镜下观察脂质体的形态，画出所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体的粒径；随后将所得脂质体溶液通过0.8μm微孔滤膜两遍，进行整粒，再于油镜下观察脂质体的形态，画出所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体的粒径。 3.操作注意 （1）在整个实验过程中禁止用火。 （2）磷脂和胆固醇的乙醇溶液应澄清，不能在水浴中放置过长时间。 （3）磷脂、胆固醇形成的薄膜应尽量薄。 (4) 60～65℃水浴中搅拌水化10min时，一定要充分保证所有脂质水化，不得存在脂质块。 （二）被动载药法制备盐酸小檗碱脂质体 1. 处方 注射用豆磷脂 0.6g 胆固醇 0.2g 无水乙醇 1～2ml 盐酸小檗碱溶液(1mg/ml) 30ml 制成30ml脂质体 2. 操作 （1） 盐酸小檗碱溶液的配制：称取适量的盐酸小檗碱溶液，用磷酸盐缓冲液配成1mg/ml和3mg/ml的两种浓度的溶液。 （2） 盐酸小檗碱脂质体的制备 按处方量称取豆磷脂、胆固醇置50ml的小烧杯中，加无水乙醇1～2ml，余下操作除将磷酸盐缓冲液换成盐酸小檗碱溶液外，同"空白脂质体制备" ，即为"被动载药" 法制备的小檗碱脂质体。 3．操作注意：同前。 （三）主动载药法制备盐酸小檗碱脂质体 1.柠檬酸缓冲液： 称取柠檬酸10.5g和柠檬酸钠7g置于1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至1000ml，混匀，即得。 2.NaHCO3溶液： 称取NaHCO3 50g，置于1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至1000ml，混匀，即得。 3.空白脂质体制备： 称取磷脂0.9g和胆固醇0.3g，置于50ml或100ml烧杯中，加2ml无水乙醇，于65～70℃水浴中溶解并挥散乙醇，于烧杯上成膜后，加入同温的柠檬酸缓冲液30ml，65～70℃水浴中搅拌水化10分钟，随后将烧杯取出，置于电磁搅拌器上，在室温下搅拌30～60分钟，充分水化，补加蒸馏水至30ml，所得脂质体溶液通过0.8μm微孔滤膜两遍，进行整粒。 4.主动载药： 准确量取空白脂质体2ml、药液(3mg/ml) 1ml、NaHCO3溶液0.5ml，在振摇下依次加于10ml西林瓶中，混匀，70℃水浴中保温20分钟，随后立即用冷水降温，即得。 5.操作注意： (1) "主动载药" 过程中，加药顺序一定不能颠倒，加三种液体时，随加随摇，确保混合均匀，保证体系中各部位的梯度一致。 (2) 水浴保温时，也应注意随时轻摇，只需保证体系均匀即可，无需剧烈摇。 (3) 用冷水冷却过程中，也应轻摇。 |
2楼2009-09-21 13:52:15
3楼2009-09-23 20:36:22
4楼2009-10-11 09:40:27