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midie

金虫 (小有名气)

[交流] 关于PCR引物

一个考研的学妹问我这个问题,我实在是不懂啊,有哪位高手能告诉我原理?
大肠杆菌某一多肽基因的编码链的序列是:
5′ACAATGTATGGTAGTTCATTATCCCGGGCGCAAATAACAAACCCGGGTTTC3′
如果使用PCR扩增该基因,需要合成两段(dNMP)6作为引物,请写出(dNMP)6核苷酸序列。
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看看如何合成引物吧? 一般是在两端的几个碱基,不过要加保护碱基~
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2009-09-20 21:08:14
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annwt

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
ACAATG
gaaacc
经常用软件,很长时间不手写了!
3楼2009-09-20 21:11:43
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by annwt at 2009-9-20 21:11:
ACAATG
gaaacc
经常用软件,很长时间不手写了!

为什么你5`端 不是配对序列而是原序列?
4楼2009-09-20 22:10:06
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lywinan

捐助贵宾 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物一般上引物与模板链相同,下引物与模板链互补,DNA是双链啊
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2009-9-20 22:10:



为什么你5`端 不是配对序列而是原序列?

5楼2009-09-20 22:23:18
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2009-9-20 22:10:



为什么你5`端 不是配对序列而是原序列?

用配对序列的话是拉不出来的!
6楼2009-09-20 22:27:35
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midie

金虫 (小有名气)

哇,谢谢各位了,我明白了
7楼2009-09-21 08:07:51
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-20 22:27:


用配对序列的话是拉不出来的!

我新手不太懂。。。你一边用原序列  一边用的是配对序列。。。能解释下原理么?谢谢
8楼2009-09-21 14:44:12
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
DNA两条链,其实每条链的引物都是与他们互补的,要不怎么合成出两条链?
为梦想努力。
9楼2009-09-21 14:52:01
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2009-9-21 14:44:



我新手不太懂。。。你一边用原序列  一边用的是配对序列。。。能解释下原理么?谢谢

还是以楼主的片段作为例子吧!
5′ACAATGTATGGTAGTTCATTATCCCGGGCGCAAATAACAAACCCGGGTTTC3′
5‘端若以其互补链作为引物6个碱基则为:3’TGTTAC5‘,这条引物在退火的时候与该链结合,成为:
......3’TGTTAC5‘
......5'ACAATGTATGGTAGTTCATTATCCCGGGCGCAAATAACAAACCCGGGTTTC3′......
因DNA聚合酶方向是5’-3‘,这样你就能看出拉出的是什么了吧?
10楼2009-09-21 23:11:10
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