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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

不纯化
连接buffer不能反复冻融,里面的dATP会降解,T4酶有没有问题啊
仕不可不弘毅,任重而道远
11楼2009-09-20 11:05:33
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spiderboy

金虫 (正式写手)

上面说了,我做过纯化,因为不纯化转化效率低。不过对于常用的那些质粒载体不纯化也是可以有较好的结果的。。。。
12楼2009-09-20 13:08:26
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smallcat227

木虫 (著名写手)


huangdi07(金币+1,VIP+0): 9-20 16:46
当然最好是纯化,不过不纯化也不会完全不长斑,你酶联的时候质粒和片段的比例是多少,建议质粒少加
13楼2009-09-20 15:30:39
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怡然之昀

木虫 (正式写手)

我用TAKARA的,一直加A后不纯化,挺好的都
14楼2009-09-20 16:17:59
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

我加的t载体是1ul,大概10ng,加的pcr片段大约为30ng,它们的摩尔比大概为7:1,用得是全式金的T-easy载体
15楼2009-09-20 16:47:52
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qqsvery

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):好好学习! 9-20 18:38
我是来学习的!
谎言和真实在河边洗澡,谎言先洗好,穿走了真实的衣服,真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言,却很难接受赤裸裸的真实。
16楼2009-09-20 18:28:47
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艾嘉


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最近我也遇到了这样的问题,要不不长斑,要不就全蓝斑,重复三遍都这样。片段浓度高点有没有影响?
17楼2009-09-20 22:43:24
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

回复五楼

全试金的载体是酶和buffer的混合液,另外我用这个载体,挑的很多白斑都是假阳性,不知道原因,我用puc做阳性对照,长出的是蓝斑
18楼2009-09-21 08:49:57
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