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小弟最近在做液相色谱，用的Betasil C18脏掉了，想请教色谱高手有关该柱的清洗方法，小弟将不胜感激！ [ Last edited by opq691 on 2009-9-19 at 11:33 ] |
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再生反相色谱柱 1、首先倒转柱子。 2、以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。 3、柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。 注意：在使用另外的淋洗方法的时候，一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液，保证其后的洗脱液可以混溶。详细见梯度洗脱需要注意到问题我也会另辟文章详细写一下流动相的互溶问题。 再生硅胶柱 1、首先倒转柱子。 2、以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照异辛烷（或己烷）—乙酸乙酯—干燥的异辛烷（或己烷）进行。 3、柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。 而对于再生极性键合柱，取决于使用的条件，可以使用反相的条件，也可以使用硅胶柱的条件。 一定要注意到是：再生会导致柱效降低，另外绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱，因为可能与固定相发生反应。四氢呋喃作为替代可以使用。 进行色谱柱再生时，我们建议最好不适用您的高效液相色谱仪上的泵。下表是建议用来冲洗的溶剂体积： 请根据您的实际情况，选择正确的再生方法： 1、极性固定相(如Si，NH2*、DIOL基色谱填料)的再生： 正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水** 2、非极性固定相(如反相色谱填料RP-18，RP-8，CN等)的再生： 水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水 3、0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱。 注意： *在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 **如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。 网上搜的 没试过：） |
2楼2009-09-21 15:28:45
3楼2009-09-21 17:23:53