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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 考马斯亮蓝测定蛋白浓度
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fdc

铜虫 (小有名气)

[交流] 考马斯亮蓝测定蛋白浓度

1考马斯亮蓝测定蛋白浓度为什么要用0.15mol/LNaCl溶液配制牛血清蛋白的标准样，与去离子水配置单俄标样有什么区别？
2牛血清清蛋白标准液 结晶牛血清清蛋白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法标定该蛋白质的百分含量或者根据牛血清清蛋白的消光系数是6.6来计算其百分含量。然后根据该蛋白的纯度配置成浓度为100 ug/ml的蛋白溶液。为什么要先计算百分含量，直接称取后使用不可以吗？
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1楼 2009-09-18 21:20:42
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liujunhero

新虫 (文学泰斗)

文献杰出贡献文献杰出贡献
★ ★
fdc(金币+1,VIP+0):谢谢，能详细点吗？ 9-18 21:56
fdc(金币+1,VIP+0):谢谢 10-13 21:58
1不要加NaCl溶液吧
2.直接称取即可
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2楼2009-09-18 21:33:26
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
fdc(金币+2,VIP+0):谢谢 10-13 21:58
我觉得加NaCl是不是为了防止蛋白在低渗的条件下变性，从而导致标准曲线测量不准确。
预先计算含量应该是由于防止蛋白不纯而使标准曲线不准确。
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3楼2009-09-18 22:43:33
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keilion

铜虫 (小有名气)
所加入NaCl是生理盐水的浓度，可能是要保证蛋白的稳定性，其实关系不大，用纯水也一样。
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4楼2009-09-21 02:49:26
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)
★
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消光系数我用的6.3啊，经验公式不是很确定啊
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5楼2009-12-14 08:45:17
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ln0401

新虫 (初入文坛)
★
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1.NaCl 是促进蛋白质溶解吧
2.预先计算应该是保证样品的吸光值在所做标准曲线的线性范围内
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6楼2009-12-14 09:13:31
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steven689

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
蒸馏水配也行，先标定是防止标样不纯。
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7楼2009-12-14 09:50:29
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
★
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这个肯定是生理盐水了。
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8楼2009-12-14 15:44:20
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N-nan

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我一般直接用蒸馏水配置，结果还不错
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9楼2009-12-14 16:30:51
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thinkingers

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
蛋白质在该浓度的NaCl下溶解度最低，使得尽可能的蛋白质沉淀，结果尽量准确
先确定含量，好进一步确定杂质，反正就是这个意思，这个我没有做过
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10楼2009-12-14 16:44:23
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