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蝶谷医仙

新虫 (小有名气)

[交流] 做qPCR时内参引物所需温度与目的基因相差5度左右,可以一起做吗?

我们用IQ5 做qPCR,因为一层楼只有这一台机器,所以每次很难预定到。我的目的基因在cycle3,step2时所需温度为62度,但我的内参是用gapdh,在cycle3 ,step2所需温度为58度,想一次性把内参和目的基因一起跑可以吗?分两次实在不方便。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:42 ]
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孔乙己

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有点多了,一般内参退火温度最好和目的基因相差不超过2-3度,不然你如何设置你的退火温度
愿大家共同进步
2楼2009-09-18 15:15:32
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Milanmy

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
内参必须和目的基因一起跑的啊,每次跑都要有相应的内参!
3楼2009-09-18 19:35:04
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經天

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以 直接做个升温PCR就可以了,我做过引物退火温度相差十几度的,控制好升温速率挺好做的,P出来的条带也很亮
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
4楼2009-09-18 20:58:20
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