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转基因愈伤蛋白水平检测不到，问题出在哪？
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求助各位大佬！！ 先说我遇到的问题哈：我拿到我的转基因愈伤组织后对他们进行了检测（DNA、RNA和蛋白水平），DNA未能检测到（载体+基因引物），RNA水平单转愈伤仅仅提高了2倍表达量，而共转愈伤提高了48倍（此前做的瞬转实验中并没有发现该基因在另一个基因过表达时发生表达上调的现象），而蛋白水平不管是单转还是共转都未能发现相对应的条带，理论上蛋白大小在130Kda左右。 我自己的分析：愈伤一直放在筛选板上生长，长势也很好，感觉应该不是没有转进去的问题；DNA提取可能存在问题，浓度比较低40左右；蛋白长度比较大，我做了6%的胶，但也仅仅在100多KDa有条带，应该不是目的带，蛋白提取应该没啥问题，跑了actin也有均一的条带。 请问问题出在哪？RNA水平既然能提高48倍，为什么蛋白水平却不能检测出来呢？可能是抗体的问题吗？ |
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