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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 相同的pcr试剂，重复性较差
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643403280

新虫 (正式写手)

[求助] 相同的pcr试剂，重复性较差 已有3人参与

求助，相同的qpcr试剂做重复，重复性很差。。是引物探针浓度不对吗？还是温度不对？

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1楼 2023-01-10 18:11:30
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LN蓝天绿树

新虫 (著名写手)
小木虫说了，nocannoBB
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2023-01-11 11:22:15
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643403280

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by LN蓝天绿树 at 2023-01-11 11:22:15
小木虫说了，nocannoBB

啥意思

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3楼2023-01-12 04:04:38
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
既然能做出来就不应该出现这样的问题，你可以细说一下，也有可能你加的样本浓度差异比较大
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4楼2023-01-12 10:30:59
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LN蓝天绿树

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 643403280 at 2023-01-12 04:04:38
啥意思
...

可能你的试剂不好了，换一批啊～

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行至水穷处，坐看云起时
5楼2023-01-12 11:22:38
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AD_com

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这种实验虚无缥缈，样品放在冰箱，今天做和明天做结果就不一样，重复性很差
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6楼2023-02-18 19:40:42
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勤劳的tRNA

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

高温变性94℃ 6min  
低温退火55℃ 1min
适温延伸72℃ 2min
重复上述步骤8·10次，最后72℃延伸10min。这样您看结果会不会好一点。
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7楼2023-03-01 12:21:49
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643403280

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 勤劳的tRNA at 2023-03-01 12:21:49
高温变性94℃ 6min  
低温退火55℃ 1min
适温延伸72℃ 2min
重复上述步骤8·10次，最后72℃延伸10min。这样您看结果会不会好一点。

买的mix，按标准2步法扩增的

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8楼2023-03-01 13:31:02
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勤劳的tRNA

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 643403280 at 2023-03-01 13:31:02
买的mix，按标准2步法扩增的
...

其实温度和PH等对核酸的影响还是比较大的。尤其是cDNA的扩增基因又相对较小，并且无内含子，不稳定，稍有变量，重复实验结果就不一样了。

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9楼2023-03-03 00:17:47
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