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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 最近做酶切为什么质粒老是别切碎啊
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我刚做，pcr产物能切过夜，但是pET-28切过夜就碎了。后来切三个小时，就能切得正好。
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梦在路就在！
11楼2009-09-20 16:14:52
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xhlxhl

木虫 (正式写手)
★
huangdi07(金币+1):谢谢参与
可能是酶的纯度不够，混有外切酶~~~~  建议试试 NEB的 HF 酶，无星号活性，过夜切也放心
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12楼2009-09-21 01:05:10
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

回复12楼

NEB的酶太贵了，是博彩的3到4倍啊，要是能用的话 当然期望用便宜的酶了
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13楼2009-09-21 08:40:14
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
huangdi07(金币+1):谢谢参与
1这两个酶切位点是位于多酶切位点区的吗，还是你自己找的，要保证质粒内部没有多的位点
2 酶有可能被污染了，有没有做单酶切和其他酶酶切作对照
3 打技术支持电话问是不是这两种酶的问题，以及使用的最佳时间
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14楼2009-09-21 08:51:44
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
huangdi07(金币+1):谢谢参与
huangdi07(金币+2,VIP+0): 9-21 18:50
我也来参与一下：首先不存在酶切时间长的问题
1，多个目的酶切位点，重新检验一下酶切位点
2，酶污染，换酶试试
3，DNA本身就污染了降解酶，酚氯仿抽提一下
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帮助虫友，提升自己
15楼2009-09-21 16:45:09
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yangym1123

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能和提取质粒的质量有关，我也碰到过这样的问题，提取质粒时注意蛋白的去除要彻底，重新提质粒没切就可以啦！
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16楼2009-09-22 08:44:07
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nhdxhjs

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切时间太长，质粒上还有其它酶切位点
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17楼2009-09-22 21:30:24
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changes

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yangym1123 at 2009-9-22 08:44:
可能和提取质粒的质量有关，我也碰到过这样的问题，提取质粒时注意蛋白的去除要彻底，重新提质粒没切就可以啦！

赞同这个观点，可能是质粒本身的问题。
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18楼2009-09-22 21:45:49
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
减少酶切时间、枪头和ep管要灭菌
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19楼2009-09-23 07:28:35
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