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huozhazha

铜虫 (正式写手)

[求助] ELISA试剂盒测过酶活性的一些问题 已有1人参与

有没有大佬用ELISA试剂盒测过酶活性的呢?我是第一次做,本身也不是微生物学专业,所以有一些问题想请教一下各位大佬:
1. 我买的是48T的试剂盒,我借的酶标仪说只能测96T的,但厂家跟我说只要是酶标仪都可以测48T的,想问下哪个是对的?
2. 如果我手头上没有酶标仪,是不是也可以用紫外分光光度计测OD值?只要做出标曲即可。
但我有个疑问就是,在酶标板上应该最后只有很少量的液体量(150 mL),但常规的石英比色皿是10mm的,液体量应该不够倒到比色皿里面的,这应该怎么处理呢?
3. 说明书要求是37℃恒温孵育,那这个恒温是要用恒温箱吗?我用水浴可以代替吗?还有就是水浴的话我怎么放置酶标板才能即加温,又不会让水进去污染反应孔呢?
非常感谢!!
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花輪君

木虫 (著名写手)

试剂盒的量应该都是按96孔板的体系给的。很原始的方法见过试管里加,用水浴锅恒温的。但是已经好几年没见过那么古老的做法了。最好还是用酶标仪,恒温箱和专门的酶标板来做

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2楼2022-12-18 14:26:19
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xiecj

木虫 (著名写手)

48T表示的是可以做48管,标准和样品一共这么多!跟酶标仪96不是一码事,酶标仪的是96孔板大小,实际上你的ELISA试剂盒里面应该也配有一个96孔板,你选择相应区域加样,在酶标仪上面对应选区测量即可。2如果你没有酶标仪,理论上是可以用分光光度计测量的,可以买狭缝比色皿,但你首先需要明确,酶标仪是高通量测量的,你用分光光度计,第一个检测和最后一个,时间上差那么久远,能准吗?3,水浴比烘箱更稳定。但注意防止你的样品被污染,混合,颠倒等。

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3楼2022-12-18 15:58:27
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huozhazha

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiecj at 2022-12-18 15:58:27
48T表示的是可以做48管,标准和样品一共这么多!跟酶标仪96不是一码事,酶标仪的是96孔板大小,实际上你的ELISA试剂盒里面应该也配有一个96孔板,你选择相应区域加样,在酶标仪上面对应选区测量即可。2如果你没有酶 ...

再请教您一下,这里的恒温孵育是指恒温孵育箱、烘箱、水浴都行吗?我只有后两个。
1. 如果用烘箱,有些人说在里面放些水保持湿度就可以了
2. 如果用水浴,那我的问题也就是怎么能保证样品不会被污染,同时还能恒温啊。毕竟酶标板本身就很矮,我应该怎么放置呢?感谢!
4楼2022-12-18 16:07:23
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huozhazha

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 花輪君 at 2022-12-18 14:26:19
试剂盒的量应该都是按96孔板的体系给的。很原始的方法见过试管里加,用水浴锅恒温的。但是已经好几年没见过那么古老的做法了。最好还是用酶标仪,恒温箱和专门的酶标板来做
...

您的意思是说,即使我买的是48孔的,但实际上我的ELISA试剂盒里面应该也会配有一个96孔板?
5楼2022-12-18 16:08:26
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xiecj

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by huozhazha at 2022-12-18 16:08:26
您的意思是说,即使我买的是48孔的,但实际上我的ELISA试剂盒里面应该也会配有一个96孔板?...

是的,ELISA本身就会事先把相应的抗体衣服在孔板上,你拿到板子就明白该怎么做了。至于气浴,水浴,如果都是半小时左右,影响不大。水浴的话,用一个自封袋也可以。

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6楼2022-12-19 19:25:51
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酸程程之

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

ELISA测酶活,市场上有一些品牌会有这类产品,属于是很不专业的哦、从专业角度来说ELISA一般用于检测含量,测酶活优先用生化试剂盒来检测,所用到的仪器也是分光光度计和酶标仪一类的,只是操作略微比ELISA复杂一丢丢。发表文献的话也是生化方法学的更容易通过的喔~~
生命以负熵为生
7楼2023-01-03 10:44:06
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