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88196861

铜虫 (小有名气)

[交流] 5-RACE求助

我最近在利用clonth的smart-race试剂盒做5-race,我利用的是巢式PCR,经过两轮PCR后发现有目的条带,进过测序,对测序结果发现在EST的5-端并没延长,反而比est序列还要短,真不知道是怎么一回事,难道是rna降解了,但接头还加上了,通过测序结果,也可以看大特异引物序列和接头引物序列,希望大家给指条路。谢谢了
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bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
88196861(金币+1,VIP+0): 9-17 14:21
88196861(金币+2,VIP+0): 10-8 14:29
RACE也要用巢式吗?会不会是引物的问题,如果没有非特异性扩增,只是条带短的话就奇怪了。个人感觉RACE就是碰运气。。。
8楼2009-09-17 11:16:02
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695

木虫 (职业作家)


88196861(金币+1,VIP+0): 9-17 08:44
要不你在合成下cDNA试试吧,我前段时间这个问题也遇到了,我也重新合成了另一对引物,但是我的测序结果还没出来,也不知道自己说的对不对,仅供参考
2楼2009-09-16 20:10:38
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛


88196861(金币+1,VIP+0): 9-17 08:44
重新合成cDNA,重新合成新对引物
但愿人长久
4楼2009-09-17 07:50:17
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gastrodia

金虫 (正式写手)


88196861(金币+1,VIP+0): 9-17 11:12
你去看一看invitrogen的5‘RACE说明书就明白你的问题出在什么地方,clontech也不是不好,毕竟方法简便,实际上invitrogen的RACE很麻烦,但是做起来很管用

[ Last edited by gastrodia on 2009-9-17 at 10:34 ]
7楼2009-09-17 10:33:47
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