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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何定Tris-HCl的PH值
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
一般是在定容之前测，定好PH后再定容，但是在定容时的体积不应该和要配的体积差别太大，并且用浓度较高的酸，然后再定容，灭菌。毕竟它是一种缓冲液，后面的定容和灭菌的体积变化对它的PH影响不大。具体要用多少的PH要看你的蛋白的PH为多少时比较稳定吧！
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11楼2009-09-17 13:51:14
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
re楼上
无需灭菌……
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12楼2009-09-17 14:09:48
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
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楼上：
灭菌时必须的吧！
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13楼2009-09-17 14:18:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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Originally posted by zhuifeng7000 at 2009/9/17, 14:18:
楼上：
灭菌时必须的吧！

从来就没见做WB的试剂是需要灭菌的
就算灭了菌，在操作过程中又不是无菌的，那么有什么灭菌的意义和必要性呢？
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14楼2009-09-17 14:28:35
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
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有时灭菌并不是需要在无菌操作的时候才需要进行的。举个例子，就像配置一定浓度的氨苄 ，配置的原液的浓度肯定是不会有杂菌生长的，但是配置的时候为什么还要用灭菌的dd水，并且要滤器过滤呢？只是为了尽可能少的带入污染而已。
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15楼2009-09-17 15:04:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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Originally posted by zhuifeng7000 at 2009/9/17, 15:04:
有时灭菌并不是需要在无菌操作的时候才需要进行的。举个例子，就像配置一定浓度的氨苄 ，配置的原液的浓度肯定是不会有杂菌生长的，但是配置的时候为什么还要用灭菌的dd水，并且要滤器过滤呢？只是为了尽可能少的 ...

配置Amp原液无需无菌水，只需配制后滤菌。
因为后续的操作是细菌，因此有必要防微杜渐。
而做WB，根本不需要无菌操作，因为根本对实验没有任何的影响。我相信世界上99.99% WB做砸了不是因为buffer染菌引起的。而应该考虑buffer的离子强度、pH、样品的制备等问题。至于里面残留的细菌含有的蛋白质是否能够对实验产生影响，我想，能够浓到产生影响的buffer估计早就不知道变质到哪里去了。而在发生这么严重的污染之前，早就用完了
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16楼2009-09-17 16:32:14
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寒山拾得

木虫 (小有名气)
先调PH再定容，定容完不影响pH。
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17楼2009-09-17 16:37:29
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
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引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-17 15:04:
有时灭菌并不是需要在无菌操作的时候才需要进行的。举个例子，就像配置一定浓度的氨苄 ，配置的原液的浓度肯定是不会有杂菌生长的，但是配置的时候为什么还要用灭菌的dd水，并且要滤器过滤呢？只是为了尽可能少的 ...

如果不灭菌，直接放到4度冰箱保存的话，过一段时间你在灯下看溶液中可能会有一些悬浮的絮状物的，那是一些杂菌。也能不同的实验室的做法不一样吧，能得到正确的实验结果就好。
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18楼2009-09-17 17:27:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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恩恩
不过我们放了之后没发现有絮状物……
有些是年初配的，到现在一直没问题~~~
不过我们用的是超纯水配的，可能有点关系
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19楼2009-09-17 17:38:16
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★
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都是调好再定容,调时的体积跟最后的体积不要差别太大,相差10倍PH会影响一个单位

一般都是8吧,不过不同的实验可能要求也不同
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20楼2009-09-17 21:32:22
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