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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

一般是在定容之前测,定好PH后再定容,但是在定容时的体积不应该和要配的体积差别太大,并且用浓度较高的酸,然后再定容,灭菌。毕竟它是一种缓冲液,后面的定容和灭菌的体积变化对它的PH影响不大。具体要用多少的PH要看你的蛋白的PH为多少时比较稳定吧!
11楼2009-09-17 13:51:14
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

re楼上
无需灭菌……
12楼2009-09-17 14:09:48
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


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楼上:
灭菌时必须的吧!
13楼2009-09-17 14:18:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009/9/17, 14:18:
楼上:
灭菌时必须的吧!

从来就没见做WB的试剂是需要灭菌的
就算灭了菌,在操作过程中又不是无菌的,那么有什么灭菌的意义和必要性呢?
14楼2009-09-17 14:28:35
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


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有时灭菌并不是需要在无菌操作的时候才需要进行的。举个例子,就像配置一定浓度的氨苄 ,配置的原液的浓度肯定是不会有杂菌生长的,但是配置的时候为什么还要用灭菌的dd水,并且要滤器过滤呢?只是为了尽可能少的带入污染而已。
15楼2009-09-17 15:04:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009/9/17, 15:04:
有时灭菌并不是需要在无菌操作的时候才需要进行的。举个例子,就像配置一定浓度的氨苄 ,配置的原液的浓度肯定是不会有杂菌生长的,但是配置的时候为什么还要用灭菌的dd水,并且要滤器过滤呢?只是为了尽可能少的 ...

配置Amp原液无需无菌水,只需配制后滤菌。
因为后续的操作是细菌,因此有必要防微杜渐。
而做WB,根本不需要无菌操作,因为根本对实验没有任何的影响。我相信世界上99.99% WB做砸了不是因为buffer染菌引起的。而应该考虑buffer的离子强度、pH、样品的制备等问题。至于里面残留的细菌含有的蛋白质是否能够对实验产生影响,我想,能够浓到产生影响的buffer估计早就不知道变质到哪里去了。而在发生这么严重的污染之前,早就用完了
16楼2009-09-17 16:32:14
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寒山拾得

木虫 (小有名气)

先调PH再定容,定容完不影响pH。
17楼2009-09-17 16:37:29
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-17 15:04:
有时灭菌并不是需要在无菌操作的时候才需要进行的。举个例子,就像配置一定浓度的氨苄 ,配置的原液的浓度肯定是不会有杂菌生长的,但是配置的时候为什么还要用灭菌的dd水,并且要滤器过滤呢?只是为了尽可能少的 ...

如果不灭菌,直接放到4度冰箱保存的话,过一段时间你在灯下看溶液中可能会有一些悬浮的絮状物的,那是一些杂菌。也能不同的实验室的做法不一样吧,能得到正确的实验结果就好。
18楼2009-09-17 17:27:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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恩恩
不过我们放了之后没发现有絮状物……
有些是年初配的,到现在一直没问题~~~
不过我们用的是超纯水配的,可能有点关系
19楼2009-09-17 17:38:16
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小猫三两只

金虫 (正式写手)


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都是调好再定容,调时的体积跟最后的体积不要差别太大,相差10倍PH会影响一个单位

一般都是8吧,不过不同的实验可能要求也不同
20楼2009-09-17 21:32:22
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