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laoma510

[交流] 酵母单杂交实验中遇到的问题。急!!!

酵母单杂交实验中遇到的问题。急!!!
大家好,我是一个酵母单杂交实验的新手,不过也接触这项工作快半年了。遇到了一些问题,希望各位能帮助解决,让大家共同进步。
遇到的问题:
    1.我的诱饵载体转酵母菌Y187,然后涂布SD/-Trp的平板上生长3-4天后,挑取酵母菌落做PCR或先在相应的液体培养基里把菌摇起来再用菌液做PCR都不能扩出我的目的基因(酵母菌落或菌液PCR用煮冻法,溶壁酶破壁法),我至今不知道原因。

     2.SD/-Trp平板,YPDA平板培养酵母3天后经常出现霉菌污染(超净工作台我用75%酒精擦洗过,紫外杀菌20分钟到30分钟),我也不知道霉菌污染来自哪里?(我初步怀疑是我的培养基中的琼脂带有霉菌)
望大家踊跃发言,献言献策,我先谢谢大家啦!!!
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wuguangxia

银虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我最近也在做酵母转化这一块,但是不是酵母杂交。我用的是SD-Ura-培养基,但是总是不长,不知道是不是培养基的问题,你用过这个么?配方如何?
你说长霉菌的问题我也遇到过,向你说的那样,也是从培养基里面长出来的,我怀疑是培养基本身没灭好。
2楼2011-08-23 10:28:37
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