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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 跑不出，几次了都说没有平台期
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湘里牧马人

新虫 (初入文坛)

[交流] 跑不出，几次了都说没有平台期 已有5人参与

实验室没人做过qpcr，导师也不指导，整体催着要结果，RNA吸光度比值2.01，浓度493ng/ul，取6ul去逆转录，是不是引物有问题，这跑的是GAPDH，恳求诸位前辈指导！

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1楼 2022-11-13 16:26:40
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美亿美生物

捐助贵宾 (职业作家)

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2楼2022-11-13 16:38:17
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fengxueren

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
逆转录500就够了

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3楼2022-11-13 17:51:17
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猫大哥

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你用的啥逆转录试剂盒啊，要加6微升的RNA，，，，我们一般总RNA用1微克，按你这浓度也就是大约2.03微升

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4楼2022-11-14 11:15:06
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从零_开始

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
GAPDH作为内参通常都是高表达的，看一下设置的循环数对不对。检测一下RNA的完整性
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5楼2022-11-14 15:05:17
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zmylatte

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果怀疑引物的问题，可以直接PCR跑电泳，看看条带。
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6楼2022-11-14 15:20:50
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