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qiafffff

新虫 (初入文坛)

[求助] 转基因烟草观察不到GFP荧光,请问如何证明目的基因转化成功?

本人将目的基因连在带有GFP标签的PBI121载体上,转化烟草,然后转基因烟草在DNA和RNA水平都鉴定过有条带,但是在荧光显微镜下观察不到GFP的荧光,请问各位虫友们,是什么原因啊?(之前做过瞬时的亚细胞定位,能观察到荧光,证明载体应该没问题,)我真的不知道该怎么判断我的烟草是不是转成功了,真诚希望得到大家的回答,帮帮孩子吧
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

用qRT和western看看有没有融合蛋白表达

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2楼2022-10-31 11:43:50
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qiafffff

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2022-10-31 11:43:50
用qRT和western看看有没有融合蛋白表达

qRTPCR做过,转基因烟草的表达量是上调的,还没做过western,请问您是说拿GFP做western嘛,可是如果看不见荧光的话,是不是很大概率在总蛋白水平western也杂不到呀?

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3楼2022-11-01 11:02:26
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

PCR你再可以试试一个引物在目的基因上,一个在GFP上。用GFP的抗体做western可以试试,说不准是别的原因导致看不到荧光。

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4楼2022-11-01 12:58:12
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Corlisssss

新虫 (初入文坛)

你好,请问问题解决了嘛?

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5楼2023-05-19 23:38:23
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