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细胞培养的部分优化策略
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细胞培养，尤其是细胞系的培养，对常规细胞而言，需要善于总结经验。然而除了基本步骤，还有哪些技巧可以让细胞养的更加漂亮呢？ 1. 不同的细胞，喜欢的环境是不一样的 这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。 有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。 2. 关于培养瓶内加入培养基的量的问题 这个确实需要自行摸索。有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。对于生长速度快的细胞，易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。但是要注意换液掌握 3. 关于选择培养瓶的问题 生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性塑料瓶相对好一些。而对于同一种细胞，在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比塑料瓶内好。这可能是因为塑料瓶比玻璃瓶更容易贴壁。生长速度快的细胞在塑料瓶这种相对「更安逸」的环境里反而长得状态不如玻璃瓶好。 所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，塑料瓶比玻璃瓶会好，对于生长速度慢的细胞，玻璃瓶则会更好。同样，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候，塑料瓶会好一点，比如刚刚复苏的时候，或者原代培养的时候。而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会好一点。 4. 传代时消化的问题 对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。 在消化的过程中，加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有「脾气」。 5. 关于换液传代时候洗瓶的问题 对于用 DMEM 培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清1640去洗细胞在随即后的几次中会比用 DMEM 洗的长的要好。同样，用 1640 培养的也有这个现象。 也可以用 PBS 来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。 |
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