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如何进行油菜茎秆和叶片的ITS扩增子自建库？
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| 我使用试剂盒提取获得了一批油菜茎秆和叶片的DNA，然后对他们进行了16S扩增子自建库，目前送测结果良好。但ITS自建库看卡了很久，主要原因有以下3点：1，我使用的ITS1区ITS1F和ITS2，理论上能够排除寄主的污染，但是没有办法排除我的油菜干扰，电泳检测到的亮带基本都是油菜序列；2,ITS很难扩（目前已经将一轮提高到了35个循环），但还是很多扩不出来，猜测可能跟DNA样品质量有关？3,扩出来也很难和油菜序列分开，无法进行切胶回收进行下一步。球球帮帮孩子！是引物问题还是样品问题？文献查阅和前辈咨询都无果！而且我觉得没可能直接把DNA送给公司去测，太难了！@天使托 |
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