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如何进行油菜茎秆和叶片的ITS扩增子自建库?
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| 我使用试剂盒提取获得了一批油菜茎秆和叶片的DNA,然后对他们进行了16S扩增子自建库,目前送测结果良好。但ITS自建库看卡了很久,主要原因有以下3点:1,我使用的ITS1区ITS1F和ITS2,理论上能够排除寄主的污染,但是没有办法排除我的油菜干扰,电泳检测到的亮带基本都是油菜序列;2,ITS很难扩(目前已经将一轮提高到了35个循环),但还是很多扩不出来,猜测可能跟DNA样品质量有关?3,扩出来也很难和油菜序列分开,无法进行切胶回收进行下一步。球球帮帮孩子!是引物问题还是样品问题?文献查阅和前辈咨询都无果!而且我觉得没可能直接把DNA送给公司去测,太难了!@天使托 |
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