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【操作篇】western blot 之蛋白含量测定已有1人参与
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WB实验在提取完蛋白质后，就要对蛋白含量进行测定 测定方法如下： 一、制作标准曲线 1、从-20℃ 取出1 mg/ml BSA，室温融化后，备用。 2、取18 个1.5 ml 离心管，3 个一组，分别标记为0 μg，2.5 μg，5.0 μg ，10.0 μg，20.0 μg ，40.0 μg。 3、在各管中加入各种试剂。 4、混匀后，室温放置 2 min。在生物分光光度计上比色分析。 二、 检测样品蛋白含量 1、取足量的1.5 ml 离心管，每管加入4℃ 储存的考马斯亮蓝溶液1 ml。室温放置30 min 后即可用于测蛋白。 2、取一管考马斯亮蓝加0.15mol/L NaCl 溶液100 μl，混匀放置2分钟可做为空白样品，将空白倒入比色杯中在做好标准曲线的程序下按blank 测空白样品。 3、弃空白样品，用无水乙醇清洗比色杯2次（每次0.5 ml），再用无菌水洗一次。 4、取一管考马斯亮蓝加95 μl 0.15mol/L NaCl溶液和5μl待测蛋白样品，混匀后静置2 min，倒入扣干的比色杯中按sample键测样品。 注意：每测一个样品都要将比色杯用无水乙醇洗2次，无菌水洗一次。可同时混合好多个样品再一起测，这样对测定大量的蛋白样品可节省很多时间。测得的结果是5 μl样品含的蛋白量。 |
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