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小瞥

铁虫 (小有名气)

[交流] 抗性对转化的影响

在做完点突变的PCR后,用Dpn1酶切,用TOP10做感受态细胞,转化后涂于Kana的培养基上, 始终长不出来。以前做氨苄抗性的都没有问题,但卡那抗性的怎么也做不出来,请问各位大侠是什么原因?小妹不胜感激
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guotieying

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是载体的抗性不同?
本来无一物,何处惹尘埃。
8楼2009-09-16 15:04:27
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这种突变的方法我也用过,Dpn I处理后直接转化,很难长出来,你可以纯化一下,然后再转化。
一个人可以不成功,但不可以不成长!
2楼2009-09-14 16:08:01
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你确定你的质粒是卡那抗性的?会不会是卡那浓度太高了?
3楼2009-09-14 19:15:18
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小瞥

铁虫 (小有名气)

是卡那抗性的,是标准的100ng/ml,没错的。我们才配的。还有,已经纯化过了,也不行。
4楼2009-09-16 10:38:00
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