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关注｜”隐形杀手“——军团菌
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新型冠状病毒于2019年12月首次发现以来，新冠疫情已经持续近三年，我们也早已习惯了出门戴口罩，每两三天做一次核酸的生活。大家都知道新冠病毒的危害有多大，所以防范意识都很强。 然而还有一种经常藏匿在我们家中，致死率远超新冠的“隐形杀手”——军团菌，却鲜有人知。 近日，阿根廷图库曼省卫生局通报，发生在阿根廷的“不明原因肺炎”被证实为军团菌感染。截至目前，该肺炎在阿根廷北部的累计确诊病例数为11例，累计死亡5例。 根据世界卫生组织的数据，军团菌病的整体病死率在5%至10%。对于免疫系统较弱的人而言，这种疾病死亡率可能会达到30%，而如果没有及时得到适当的治疗，死亡率还可能会进一步上升到40%至80%。 什么是军团菌 军团菌（Legionella spp.）是一种革兰氏染色阴性杆菌，是引起军团菌病（ legionnaires disease，LD）的病原菌。1976 年美国费城退伍军人协会大会上所爆发的重症肺炎，该病症被人们称为军团病，通过对军团病进行的大量研究，发现军团病是由军团菌所诱发，并在 1978 年的第一次军团病国际学术会议中将其命名为“噬肺军团菌（Legionnella pneumophila, LP）”，自此，军团菌导致的环境及健康问题浮现在大众面前。 分类 军团菌（Legionella）是一种广泛存在于自然界中的机会致病菌，能引起以发热和呼吸道症状为主的疾病称军团菌病（LD），其中最为多见和严重的临床类型为以肺部感染为主，同时伴有全身多系统损害的军团菌肺炎。 根据 DNA 相关性研究，军团菌科分三个属：军团菌属（Legionella)，塔特洛克菌属(Tatlockia)和荧光杆菌属 (Fluoribacter)。，在已知军团菌属中的 58 个种和 70 个血清型中，有 20 多种能引起人类疾病。嗜肺军团菌( L . pneumophila )、米克戴德军团菌( L . micdadei )、长滩军团菌( L . longbeachae )、博杰曼军团菌( L . bozemanae )和杜莫夫军团菌( L . dumoffii )是临床最重要的军团菌，代表菌种为嗜肺军团菌。 据目前美国疾控中心的统计研究发现，90%的军团病爆发与噬肺军团菌有关。噬肺军团菌是引起军团病和庞蒂亚克热 (Pontiac fever) 的重要病原体，现发现其有16 个血清型 [8] ，其中血清 1 型（Lp1）是引起疾病最常见的临床和环境分离株，其次为 4 型和 6 型。 根据2007年世界卫生组织（WHO）指南，军团菌病分为3种亚型： ①肺炎型军团菌病（LD） 以肺炎为主要临床表现的军团菌感染，又称军团菌肺炎； ②肺外综合征，即感染从肺部播散至肺外其他系统； ③庞蒂亚克热，主要表现为急性发热，病程呈自限性。 男性多于女性，老年人、吸烟酗酒者以及免疫功能低下者易患此病！ 生物学特性 军团菌属革兰氏染色阴性，杆状，菌体大小为 0.3～0.9 μm×1.5～5.0 μm，常呈两端钝圆长丝状或纺锤状，但不同生长期细胞可为不同形态，有显著多形性。基本没有荚膜和芽孢，大多有一端鞭毛和有伞状菌毛。Dieterle 镀银染色为黑褐色，Giemsa 染色为红色。 军团菌需氧，最适生长温度为35~37℃，最适pH为6.4~7.2，每年7、8、9月军团菌肺炎较高发。军团菌很喜欢在温水及潮热的地方生存蔓延，空调、热水器、淋浴器、温泉等都是它生长繁殖的温床。 对自然界抵抗力强，在水中至少可生存 415天。在 1%福尔马林、70%乙醇或0.125%戊二醛溶液中,1分钟死亡。 如何传播 1、传染源：被污染的各种水源。 2、传播途径：主要的感染途径是人吸入被污染的气溶胶，气溶胶来源包括空调冷却塔、冷热水系统、加湿器、温泉等。感染可通过吸入受污染的气溶胶而发生，特别是易感的住院病人。 3、易感人群：免疫力尤其是细胞免疫力低下者。 流行病学 军团菌肺炎，在国外早已是常见病症，但国内在临床军团菌病方面仍处于初级水平，临床标本的检出率极低，环境标本的检出率约为40%，目前，被军团菌污染水体是对人类安全健康构成最大威胁的传染源。从 1982 年南京首次爆发军团菌病症以来，我国对军团菌病的暴发流行的报道此起彼伏，对于临床标本和环境标本菌体的检出率也呈上升趋势。由于对中央空调水塔系统的设计和管理建设的不当，极易造成军团菌污染，使之成为造成军团菌病的主要罪魁祸首。 当我们处于含有军团菌气溶胶的环境中时，通过呼吸，军团菌可直接进入我们的呼吸系统，吸附中性粒细胞或吞噬细胞，进入并形成小体，繁衍生殖导致细胞破裂死亡，所产生的淋巴因子和细胞毒性因子损害肺脏。此外，军团菌还可以直接产生并释放各种酶和毒素，损害肺脏。军团菌病以肺炎为主要表征，同时常常伴随多系统损害，其临床症状非常不典型导致其常被误诊，故而死亡率高且易爆发流行。 由于目前还没有研发军团菌病的预防疫苗，只能通过及时发现、及时就医来避免军团菌造成的伤亡。同时需有关部门对冷却塔和水管网等军团菌可能大量增值的设施设计管理与清理维修，以及相关大型公共场所空调系统及水系统的及时清理来对军团菌病进行预防。 检测方法 科技飞速发展，人们生活水平日益提高，空调体系遍布全球的每个角落，供水系统应用更是广布，这无疑给军团菌提供了生存的温床，军团病发病率呈现上升趋势，这让我们不得不把军团病重视起来。与此同时，我们还需要进一步研究病原标本及水环境中所分离出的军团菌株的遗传关系和差异，对军团菌进行分类和分型，从而确定军团菌病的发生、传播与流行之间的关系。军团菌的常用检测方法如下。 细菌培养法 军团菌是一种对养分要求很高的苛养菌，分离培养较为困难，专性需氧，专性需氧，CO 2 环境可促进生长，最适生长温度 35 ℃，必须在 pH6.8～pH7.0，含α 酮戊二酸、 L-半胱氨酸和铁盐的培养基上才能生长。检测军团菌感染的金标准就是细菌培养方法，我们通过在 BCYE 培养基中加入 0.01%溴甲酚紫和 0.001%溴酚蓝，来鉴定军团菌科。我国多采用 BALM 培养基取代价格较高的 BCYE 培养基。作为临床确诊鉴定的金标准，培养法具有较强的敏感性和特异性，但又有价格昂贵、耗时长、难度大等缺陷。 免疫血清检测 免疫血清学检测方法主要有血清抗体检测和特异性抗原检测手法，这种检测手段得到的检测结果可信度高，易于操作，但缺点是容易产生假阳性和交叉反应。 分子生物学方法 选择军团菌的特异性基因片段，设计引物、探针，通过扩增或杂交的手段来诊断军团菌。目前研究中常用的片段主要包括：16SrRNA，5SrRNA，mip 基因，23S-5S间区等。 探针检测技术以核酸杂交反应为检测原理，在一定的条件下，探针与微生物基因组发生互补杂交反应，来鉴定有无军团菌的感染。根据标记方式不同，探针可分为放射性同位素标记、生物素标记、酶标记和荧光素标记等等。目前该方法已被美国疾控中心用作对军团菌检测分类的一种常规手段，核酸杂交方法特异性强，且检测限可达到 10 CFU/mL，能检测出微生物的群落结构信息，但又存在探针序列复杂、重复性差等缺陷。 聚合酶链式反应 PCR 是目前应用最为广泛的分子生物学检测技术，用实时荧光定量 PCR 技术检测军团菌样本具有灵敏度高、特异性好的优点，但需要昂贵的仪器、专业的实验室等，不能达到现场检测的要求。 近些年发展迅速的等温扩增技术具有等温、快速、操作简单和特异性好、灵敏度高、设备要求低等优点，适合在基层及户外现场进行各类病原体快速检测。特别是重组酶与聚合酶检测技术可在 37-42 ℃的等温条件下、5-20 min 实现特定核酸的快速扩增。 重组酶与聚合酶检测技术因其反应时间短，特异性强，结果肉眼可见、对设备技术要求低等优势，已逐渐被应用于致病微生物的快速检测、转基因成分检测、疾病诊断等领域。 RAPID技术平台可用于军团菌现场快速检测，为军团菌防控检测提供一种新的、可靠的技术支持。 |
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