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吉田bio铜虫 (小有名气)
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甲型肝炎病毒动物模型
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甲型肝炎病毒动物模型 (一)甲型肝炎病毒树鼩模型 【造模机制】甲型肝炎主要经粪口途径(消化道)传播其他途径有血液传播、垂直传播等。被甲肝病人大便污染的水、食物等,未经彻底消毒被人饮用或食用很容易引起甲肝的发流行。 【造模方法】甲肝病人甲肝抗原阳性大便，制成5%悬液，并依次以3000r/min及8000r/min各离心30分钟，上清冻存于-80℃。每只动物口服 5%甲肝病人甲肝抗原阳性新鲜大便悬液0.5ml，相当于0.025g大便，对照组动物服同量正常人大便悬液。 【模型特点】于感染后7~13天的粪便提取物可测得甲肝抗原，持续排毒15~21天，放免法(RIA)滴度为1:10~1:32030天后排毒停止。对照组动物均未测出甲肝抗原;用第一代感染树鼩甲肝抗原阳性粪便制备的10%悬液给每只正常树鼩口服1ml进行第二代感染;感染后约一周仍能在其粪便中查到抗原，排毒持续12~27天，其高峰在7~13天;第二代感染动物排毒高峰期粪便的10%悬液，以同法进行第三代感染，后者粪便中也能查到抗原。 树鼩感染甲肝病毒后肝功能的改变及其与粪便排毒的关系:动物于感染前一周和感染后隔周一次从心脏采血，当天测定其血清谷丙转氨酶(SGPT)活性,第一代感染动物只有1/9于感染后4周出现SGPT升高，无其他症状;第二代有1/2于感染后4~6周出现SGPT升高，2周内降到正常，动物食欲明显减退，持续二个月后才恢复;第三代有2/3于感染后2周出现SGPT 升高，2周后下降，无其他症状。观察了第一代和第二代树鼩血清转氨酶的改变和粪便中排毒的关系，看到其排毒高峰均在SGPT升高前9~18天SGPT升高时排毒量已减少或终止。甲肝病毒感染后，树鼩在感染后6~16周相继死亡，病理检查发现其肝脏呈不同程度的充血、水肿，以及颗粒和脂肪性变，库普弗细胞增生，偶有小的肝实质细胞坏死点。甲肝病毒感染后，树鼩在感染后6~16周相继死亡，病理检查发现其肝脏呈不同程度的充血、水肿，以及颗粒和脂肪性变，库普弗细胞增生，偶有小的肝实质细胞坏死点。 【注意事项】从事病毒性肝炎的研究和动物模型的建立时，对实验室和人员防护有一定的要求。根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录中规定:肝炎病毒(甲、乙、丙、丁、戊型)属于三类，应在ABSL-2实验室进行。个人防护要求:口罩帽子、乳胶手套等。 【应用范围】 1.甲肝病毒可在树鼩体内繁殖，感染后7~13天开始从粪便排毒;持续15~21天,随着病毒在树鼩体内传代,潜伏期似有缩短,感染率也趋于增高;多数动物为非临床型,第一代感染动物仅个别有一过性SGPT升高，似与病毒的适应性有关。 2.感染后2~16周，有78%的实验组动物血清中出现甲肝病毒抗体，然其滴度较低，且有的很快不能再现,对照组的动物，服正常人大便滤液之前后,持续测出较高滴度的甲肝病毒抗体，则可能是自然感染所致,因树鼩有吃人粪的习性，当地人称其为“屎鼠”。 3.用固相放射免疫阻抑试验及免疫电镜观察病毒颗粒的大小，形状和免疫学性质，均证明从感染树鼩粪便提取的抗原与人的甲肝病毒相似。 4.感染树鼩尸检看到其肝脏充血、水肿及实质变性;但和国内外用甲肝病毒感染狨猴、黑猩猩和红面猴比较,树鼩肝脏病变较轻,没有出现急性肝炎的典型改变，这可能和病毒的感染量、毒力及其在树鼩体内的繁殖程度有关。 【模型评估】以人甲肝抗体包被聚苯乙烯管,加不同稀释度受染动物粪便抗原，置37C孵育6小时后洗掉,加4个免疫粘连血凝(IAHA)单位的甲肝病人恢复期血清封闭(37℃ 2小时后洗掉)后，加125I-HAAb01ml置37C16~18小时后洗掉，用r计数器计算，与对照组抗原相比抑制计数50%以上者为阳性。第1代或第2代树鼩粪便抗原，均能被已知人的甲肝病毒抗体所抑制,说明树鼩粪便抗原与人的甲肝病毒有关，测定5份甲肝住院病人双份血清的甲肝病毒抗体，结果看到，无论用甲肝病人大便抗原或从树鼩粪便分离的抗原测定，病人恢复期血清中的抗体滴度均比急性期有4倍以上升高，进一步证明树鼩粪便抗原与人的甲肝病毒有关。 |
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