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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于提取质粒的一些苦恼
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plantst5928

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于提取质粒的一些苦恼

最近在构建载体，所以要经常提取质粒，但是现在遇到一个很苦恼的问题，不同的菌种，摇菌的时间相同，提取的步骤和试剂盒都是一样的，但是提取出来的结果却大不相同，分子量小的那个，上样1ul就很亮，但是稍大的那个（大约6kb）就几乎看不到带，我已经反复提了好几次都是这个样，试剂盒用的是威格拉斯的小提。哪位能告诉我怎么才能把分子量大的提的好些。
还有我在加进p3离心后，上清总是不那么清亮，老是有一些白色的小悬浮物，多甩了几次也没甩下去，是不是菌株有问题，大家一般摇菌都是用多少培养基，摇多长时间？

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-15 at 10:49 ]
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1楼 2009-09-13 19:45:14
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yxhan7113

金虫 (小有名气)
★
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大的质粒的拷贝数高不高？
一般摇菌2~4mL，过夜就可以
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2楼2009-09-13 20:21:18
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们用的Takara和生工的，6KB多的经常提，没出现过问题
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为梦想努力。
3楼2009-09-13 21:44:31
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savetheday

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
阳性菌要加溶菌酶水浴一小时,不知道你做了没?
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Godbless
4楼2009-09-14 08:44:26
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rosalie161

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换个好一点的试剂盒，再提试试！应该是在菌内的拷贝数太低的原因！
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Rosalei.....
5楼2009-09-14 08:46:37
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Nadia_long

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果是拷贝数太地，要换midi或者maxi吧
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6楼2009-09-14 09:19:23
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议换个试剂盒试试，既然小分子量的提的效果好，那说明你的操作手法应该没什么问题，祝你成功哦！
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2009-09-14 09:40:10
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w.king124

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
自己配试剂吧，也不麻烦，提出来的效果很好，还锻炼一下
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8楼2009-09-14 10:34:32
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wrb456

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
摇上10ml以上体积的菌液，每5ml菌液用200ul的手工溶液1悬起，再用200ul手工溶液2混匀,再加300ul手工溶液3,高速离心后，弃去沉淀。上清加入700ul的异丙醇，冰水浴10分钟。高速离心，弃上清，沉淀就以试剂盒一次抽提的量操作。相当于将n个1.5ml集合到一根柱子，可以大大提高质粒的量！
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9楼2009-09-14 16:49:33
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)
可能是大质粒的拷贝数太低
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10楼2009-09-14 19:53:59
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