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人偏肺病毒的可视化检测 已有1人参与
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人偏肺病毒(hMPV) 是 2001 年在荷兰发现的一种副黏病毒，是社区获得性呼吸道感染较为常见的一种病原体，特别是婴幼儿、老年人和免疫功能受损患者中急性呼吸道感染的重要病原体。hMPV感染会导致上呼吸道或(和)下呼吸道感染。以陕西科技大学钱卫东教授牵头的研究团队在国际期刊《Virus Research》（病毒研究，2022年IF：6.286）杂志上发表了一篇，基于RAPID平台与CRISPR-Cas12a结合的核酸快检技术，应用于人偏肺病毒的可视化检测的文章。 该研究结合了重组酶和聚合酶等温检测 (RAPID)技术的强大扩增能力，以及Cas12蛋白质高特异及反式切割活性，并分别结合荧光检测与层析试纸条，开发出了可用便携式荧光检测仪或者可目视化观察检测结果的新技术，该技术使用更加方便快捷，未来可应用于机场、社区、学校、家庭等场所，进一步拓宽了该检测技术的应用场景。近年来，基于CRISPR-Cas体系的快速检测方法已开发出来并应用于各种病原体，如SARS-CoV-2、猪繁殖与呼吸综合征病毒、非洲猪瘟病毒、植物RNA病毒、食源性致病菌等。CRISPR-Cas12a体系用于检测人偏肺病毒的应用尚未建立。因此，陕西科技大学实验室开发了一种RAPID/CRISPR-Cas12技术体系检测技术，该体系诊断人偏肺病毒N基因具有极高的敏感性和特异性。检测用时短，试剂成本低，仪器使用简单，在临床检测方面具有显著的优势。本研究构建的两种方法，荧光检测和层析试纸条法分别可在35分钟或者45分钟完成。灵敏度可达6.97×102拷贝/ml，不会与其他呼吸道病原体，如人博卡病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒发生交叉反应。总体而言，重组酶聚合酶等温扩增和 Cas12a检测的复合体系是可靠和快速检测 hMPV的替代工具，特别适用于条件有限的资源匮乏地区。 原文链接：https://doi.org/10.1016/j.virusres.2021.198568 偏肺病毒的起源 人偏肺病毒是感染人呼吸道的一种临床上较为多见的病原体。2001年首次在荷兰一名儿童患者鼻咽分泌物中发现。这种病毒是单股负链RNA目，属于副粘病毒科肺病毒亚科。当时由于这种新病毒与偏肺病毒属中的禽类肺炎病毒核苷酸序列有较高的同源性，于是被称为人偏肺病毒，后在2019年被国际病毒分类委员会正式命名为人偏肺病毒。 人偏肺病毒的流行病学特性 人偏肺病毒全年均可发病，流行季节多在晚冬、春季和夏季早期。近年来由于实验室检测技术的提高，临床偏肺病毒的检出率大幅度提升。有学者研究成果显示人偏肺病毒是儿科呼吸道疾病中仅次于呼吸道合胞病毒的第二位致病病因，在儿科呼吸道疾病中起着非常重要的作用。此外由于各国各地地域坏境条件，检测方法等的不同以及不同地区人群免疫状况有所差别，造成偏肺病毒的感染率在世界各国都存在显著差异。 人偏肺病毒感染的临床症状 偏肺病毒的感染好发于婴幼儿，症状严重程度可不一样，有的患儿只有轻微的上呼吸道感染症状，但有的会造成严重的支气管炎和肺炎，另外有少数患儿也可以没什么临床症状。最常见的临床表现有咳嗽，肺湿啰音，发热，喘息，鼻塞流鼻涕，气促等。 传播途径和潜伏期 病毒可经由直接或间接接触而传播。人类偏肺病毒感染多透过以下途径接触患者而传播：咳嗽和打喷嚏的分泌物；密切接触如触摸或握手；和接触那些受病毒污染的物件或表面，然后触摸口、鼻或眼睛。潜伏期一般为3~6天。 人偏肺病毒的实验室检测 检测人偏肺病毒感染的方法有三种，它们是分离培养、血清学检测以及核酸检测。 根据文献分析，在诸多的hMPV检测方法中，病毒培养是hMPV检测的金标准；但hMPV生长缓慢，分离阳性率偏低，更多是用于实验研究及药敏试验等。 酶联免疫吸附法（ELISA）虽不适用于临床早期诊断，但对于回顾性调查hMPV原发感染和再感染具有重要意义。 由于 hMPV在细胞中生长缓慢，临床检测主要采用逆转录PCR(RT-PCR)方法。hMPV N基因在核酸序列和氨基酸序列都是最保守的(分别为 91. 2% 和 98. 4%)，常用于 hMPV 检测,G 基因是差异最大的(分别为 79% 和 59. 2%)，可用于分型，通过 real time RT-PCR扩增hMPV 这两个基因，进行测序就可以鉴别诊断出hMPV的四种亚型。另有研究显示仅检测N基因也能鉴定出aMPV和hMPV所有亚型，PCR方法具有较高的特异性和灵敏度，但是需要专业的技术人员、贵重的仪器以及专门的实验场地。 近年来兴起的重组酶聚合酶扩增技术是一种有望替代PCＲ的新型核酸扩增技术，其主要基于重组酶聚合酶介导的扩增原理，体外模拟生物体内 DNA 复制，在恒温条件下即可对目的片段实施扩增，尤其适用于各种病原体的快速检测。相较于传统聚合酶链式反应而言，重组酶聚合酶扩增技术具有反应温度恒定、扩增速度快、检测成本低、使用仪器简单以及结果可靠等优势，尤其适用于现场快速检测，对急需诊断结果的患者而言意义十分重大。重组酶聚合酶扩增技术在 hMPV 快速诊断中的应用价值较高，可获得较为理想的灵敏度、特异度以及准确度，有望成为替代传统PCＲ的有效检测方式，值得临床推广应用。 RAPID技术平台可用于hMPV的现场快速检测，为hMPV的防控检测提供一种新的、可靠的技术支持。 |
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