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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助! 做了克隆过后测序和目的基因比对不上
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Senni94

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助! 做了克隆过后测序和目的基因比对不上

求助！做了分子克隆，测序过后和目的基因比对不上怎么办啊？ 获取目的片段的时候，是看着大小差不多的切的胶，连上了完全比对不上，物种都不对了。这种事什么情况啊？应该怎么办啊。
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1楼 2022-08-30 16:37:37
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Italyhope

金虫 (正式写手)
重新挑平板上其他菌，多挑几个，做菌落PCR，能PCR出来且条带正确的，选几个扩大提质粒，酶切验证一下。以上都对了再送一两个去测序。如果菌落PCR都出不了正确条带，只能从头克隆和连接。

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2楼2022-08-30 21:54:32
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Senni94

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Italyhope at 2022-08-30 21:54:32
重新挑平板上其他菌，多挑几个，做菌落PCR，能PCR出来且条带正确的，选几个扩大提质粒，酶切验证一下。以上都对了再送一两个去测序。如果菌落PCR都出不了正确条带，只能从头克隆和连接。
...

我就是挑了好几个菌去做了菌落PCR 做了三次重复 测序结果都是一样的 它比对出来 都是另一个物种了
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3楼2022-08-31 15:10:47
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