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Qwerty999

新虫 (初入文坛)

[求助] 阿米巴全基因组DNA提取 已有2人参与

各位老师, 最近在做阿米巴全基因组DNA提取,试过酚-氯仿法、过柱子的试剂盒、磁珠的试剂盒,效果都不好,有拖尾,送公司质检也总是报告“DNA严重降解”,后来加了RNA酶室温5min,小片段拖尾少了,但是如果同样RNA酶水浴37℃ 1h就会发现我认为的DNA条带也不见了!这是为什么啊,难道DNA直接没有提取出来吗?我还按照文献上液氮冻融、研磨的方式进行了提取,发现只要液氮一处理,电泳条带更糟糕。
今天联系公司,想让公司帮忙提取一次,公司说阿米巴有传染性不给提取,只能自己做,也不收取回收的胶块,我已经做了一个月了,一点进展都没有,谢谢各位老师解答疑惑@biostar2009
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


2楼2022-08-15 22:44:44
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Qwerty999

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yubeihong at 2022-08-15 22:44:44
电泳条带看一下

老师,请问怎么回复图片啊我还不大会用小木虫
3楼2022-08-23 08:18:19
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Qwerty999

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yubeihong at 2022-08-15 22:44:44
电泳条带看一下

6789泳道是基因组DNA,麻烦您帮忙看一下,第二张图是rna酶37℃水浴1小时电泳结果
阿米巴全基因组DNA提取


阿米巴全基因组DNA提取-1


阿米巴全基因组DNA提取-2



发自小木虫Android客户端
4楼2022-08-23 08:24:40
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


最上那个条带才是基因组吧

发自小木虫IOS客户端
5楼2022-08-26 11:44:08
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Qwerty999

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yubeihong at 2022-08-26 11:44:08
最上那个条带才是基因组吧

嗯嗯,公司说样本质检严重降解,没法测序
而且加了RNase以后为啥上面的条带也没有了呀

发自小木虫Android客户端
6楼2022-08-26 21:43:03
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 嘟嘟鼎 at 2022-08-26 21:43:03
嗯嗯,公司说样本质检严重降解,没法测序
而且加了RNase以后为啥上面的条带也没有了呀
...

DNA并没有降解,换几家RNase A看看。要么你就切胶回收上面的基因组片段
核酸提取与Taqman诊断
7楼2023-02-14 16:11:48
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tybo

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

问了我们研发同事,从你的描述初步判断可能是以下原因:1、即便室温条件下,DNA也会降解,你这水域时间过长,导致DNA降解;2、目前市场上有多种RNA酶,不知道你用的是哪一种?某些RNA酶不是特异性消化RNA,也会消化DNA;3、可能DNA提取效果比较差;建议和我们的技术进行沟通,上海领骏生物科技有限公司,www.lnjnbio.com;也可以用我们的磁珠法动物组织DNA提取试剂盒试试;
8楼2023-11-06 14:17:42
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天照小星星

新虫 (小有名气)

1.样本要离心过滤得到纯的样本  2.液氮研磨 3.加rna酶去掉rna 4.胶回收富集DNa 5.加我qq2589149676

发自小木虫Android客户端
9楼2023-11-07 23:31:54
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