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蛋白检测|那些不听话的条带，我该拿它怎么办？
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辛辛苦苦，按部就班， 做完了大半实验 发现没有出现理想的结果 重来一遍？ 又不知道问题出在了哪里 我来回复那些关于条带的问题，帮助你有效避坑。 当条带出现位置比预期低或高是什么原因？如何解决呢？ ①当条带出现位置比预期低： 原因：目的蛋白经过剪切或降解，有相同或相似抗原表位的蛋白被抗体检测出 解决办法：样品准备时候要在冰上操作；加入更过蛋白酶抑制剂；更换别的抗体 ②当条带出现位置比预期略高： 原因1：蛋白可能被糖基化，或氨基酸基被修饰 解决办法：使用酶去除可能的蛋白修饰；检查抗原序列 原因2：可能有融合蛋白 解决办法：查看表达序列 原因3：蛋白形成二聚体或多聚体 解决办法：加强变性条件 当条带比较模糊的时候，是什么原因？如何解决呢？ 原因：是否转膜电压过高；转膜中是否有气泡残留；转膜缓冲液组分问题 解决办法：降低转膜电压，重新配制缓冲液，在电转之前小心的移除膜和胶之间的气泡 当条带分布不均匀，是什么原因？如何解决？ 原因：也可能孵育时振荡不均匀，抗体和封闭液不结合 解决办法：离心，分离二抗中的聚合体，确保孵育过程中膜完全浸没在抗体中；孵育时确保震荡均匀，尝试更换封闭液分离胶聚合不均匀，导致蛋白电泳不一致：调整聚合条件，分离胶溶液混匀后再进行聚合 转膜后为什么条带扭曲？大分子条带扭曲？胶里的蛋白条带没事。 原因：大分子条带扭曲可以多跑一会试试，看看上胶的时候是不是不均匀。注意转膜时胶或者膜是否平整。 解决办法：降低跑胶电压，延长电泳时间 目的蛋白条带是白色的，其余地方全是黑色，是什么原因？ 白色可能是浓度太高了，黑色是显色液不足导致。 解决办法：调整曝光参数重新曝光，或调整蛋白上样量重新电泳 不带标签的蛋白上样后，利用抗his标签单抗进行孵育，然后出现条带怎么办？条带还不是目的条带，利用卡马斯亮蓝染色又没有出现那个条带是什么原因？ 单孵育二抗看看是不是非特异，考马斯蓝分辨率不够，目标蛋白不足，都会不出现条带。 凝胶电泳整块胶都有杂带是什么原因？Marker孔看不出来，没有加蛋白孔也有杂带。 原因1：整块胶都有杂带可能是加太多溢出来了，marker孔看不出来加得少，确定一下梳子孔是不是坏了，还有可能是蛋白和抗体不结合 原因2：电泳液或其他缓冲液重复使用有蛋白污染，或其他接触膜的试剂或设备有蛋白污染 解决办法：更换缓冲液，清洗设备重新实验。 为什么边孔的条带要翘起来？ 一般不用最边上的孔，它用来跑marker。辛辛苦苦，按部就班， 做完了大半实验 发现没有出现理想的结果 重来一遍？ 又不知道问题出在了哪里 今天小助手汇总了抖音粉丝私信过我们的那些关于条带的问题，帮助你有效避坑。 当条带出现位置比预期低或高是什么原因？如何解决呢？ ①当条带出现位置比预期低： 原因：目的蛋白经过剪切或降解，有相同或相似抗原表位的蛋白被抗体检测出 解决办法：样品准备时候要在冰上操作；加入更过蛋白酶抑制剂；更换别的抗体 ②当条带出现位置比预期略高： 原因1：蛋白可能被糖基化，或氨基酸基被修饰 解决办法：使用酶去除可能的蛋白修饰；检查抗原序列 原因2：可能有融合蛋白 解决办法：查看表达序列 原因3：蛋白形成二聚体或多聚体 解决办法：加强变性条件 当条带比较模糊的时候，是什么原因？如何解决呢？ 原因：是否转膜电压过高；转膜中是否有气泡残留；转膜缓冲液组分问题 解决办法：降低转膜电压，重新配制缓冲液，在电转之前小心的移除膜和胶之间的气泡 当条带分布不均匀，是什么原因？如何解决？ 原因：也可能孵育时振荡不均匀，抗体和封闭液不结合 解决办法：离心，分离二抗中的聚合体，确保孵育过程中膜完全浸没在抗体中；孵育时确保震荡均匀，尝试更换封闭液分离胶聚合不均匀，导致蛋白电泳不一致：调整聚合条件，分离胶溶液混匀后再进行聚合 转膜后为什么条带扭曲？大分子条带扭曲？胶里的蛋白条带没事。 原因：大分子条带扭曲可以多跑一会试试，看看上胶的时候是不是不均匀。注意转膜时胶或者膜是否平整。 解决办法：降低跑胶电压，延长电泳时间 目的蛋白条带是白色的，其余地方全是黑色，是什么原因？ 白色可能是浓度太高了，黑色是显色液不足导致。 解决办法：调整曝光参数重新曝光，或调整蛋白上样量重新电泳 不带标签的蛋白上样后，利用抗his标签单抗进行孵育，然后出现条带怎么办？条带还不是目的条带，利用卡马斯亮蓝染色又没有出现那个条带是什么原因？ 单孵育二抗看看是不是非特异，考马斯蓝分辨率不够，目标蛋白不足，都会不出现条带。 凝胶电泳整块胶都有杂带是什么原因？Marker孔看不出来，没有加蛋白孔也有杂带。 原因1：整块胶都有杂带可能是加太多溢出来了，marker孔看不出来加得少，确定一下梳子孔是不是坏了，还有可能是蛋白和抗体不结合 原因2：电泳液或其他缓冲液重复使用有蛋白污染，或其他接触膜的试剂或设备有蛋白污染 解决办法：更换缓冲液，清洗设备重新实验。 为什么边孔的条带要翘起来？ 一般不用最边上的孔，它用来跑marker。辛辛苦苦，按部就班， 做完了大半实验 发现没有出现理想的结果 重来一遍？ 又不知道问题出在了哪里 今天小助手汇总了抖音粉丝私信过我们的那些关于条带的问题，帮助你有效避坑。 当条带出现位置比预期低或高是什么原因？如何解决呢？ ①当条带出现位置比预期低： 原因：目的蛋白经过剪切或降解，有相同或相似抗原表位的蛋白被抗体检测出 解决办法：样品准备时候要在冰上操作；加入更过蛋白酶抑制剂；更换别的抗体 ②当条带出现位置比预期略高： 原因1：蛋白可能被糖基化，或氨基酸基被修饰 解决办法：使用酶去除可能的蛋白修饰；检查抗原序列 原因2：可能有融合蛋白 解决办法：查看表达序列 原因3：蛋白形成二聚体或多聚体 解决办法：加强变性条件 当条带比较模糊的时候，是什么原因？如何解决呢？ 原因：是否转膜电压过高；转膜中是否有气泡残留；转膜缓冲液组分问题 解决办法：降低转膜电压，重新配制缓冲液，在电转之前小心的移除膜和胶之间的气泡 当条带分布不均匀，是什么原因？如何解决？ 原因：也可能孵育时振荡不均匀，抗体和封闭液不结合 解决办法：离心，分离二抗中的聚合体，确保孵育过程中膜完全浸没在抗体中；孵育时确保震荡均匀，尝试更换封闭液分离胶聚合不均匀，导致蛋白电泳不一致：调整聚合条件，分离胶溶液混匀后再进行聚合 转膜后为什么条带扭曲？大分子条带扭曲？胶里的蛋白条带没事。 原因：大分子条带扭曲可以多跑一会试试，看看上胶的时候是不是不均匀。注意转膜时胶或者膜是否平整。 解决办法：降低跑胶电压，延长电泳时间 目的蛋白条带是白色的，其余地方全是黑色，是什么原因？ 白色可能是浓度太高了，黑色是显色液不足导致。 解决办法：调整曝光参数重新曝光，或调整蛋白上样量重新电泳 不带标签的蛋白上样后，利用抗his标签单抗进行孵育，然后出现条带怎么办？条带还不是目的条带，利用卡马斯亮蓝染色又没有出现那个条带是什么原因？ 单孵育二抗看看是不是非特异，考马斯蓝分辨率不够，目标蛋白不足，都会不出现条带。 凝胶电泳整块胶都有杂带是什么原因？Marker孔看不出来，没有加蛋白孔也有杂带。 原因1：整块胶都有杂带可能是加太多溢出来了，marker孔看不出来加得少，确定一下梳子孔是不是坏了，还有可能是蛋白和抗体不结合 原因2：电泳液或其他缓冲液重复使用有蛋白污染，或其他接触膜的试剂或设备有蛋白污染 解决办法：更换缓冲液，清洗设备重新实验。 为什么边孔的条带要翘起来？ 一般不用最边上的孔，它用来跑marker。 |
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