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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » T载体的阳性转化子，pcr检测怎么大小不一样啊
汕头大学海洋科学接受调剂
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88196861

铜虫 (小有名气)

[交流] T载体的阳性转化子，pcr检测怎么大小不一样啊

我将pcr产物进行跑胶检测，对目的条带还进行了回收，然后与T载体连接，转化DH5a，挑取阳性克隆子进行pcr鉴定时，怎么么发现条带大小不同，并且有的和目的条带一样，有的却不同，那位能帮帮忙
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1楼 2009-09-11 22:14:52
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daisy8373

金虫 (正式写手)
★
88196861(金币+1,VIP+0): 9-12 14:49
可能是因为你的引物的特异性不够高，跟载体序列也能结合，最好提高TM值看看
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生命中总有那么一段时光，充满不安，可是除了勇敢面对，我们别无选择。
3楼2009-09-12 09:03:22
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
88196861(金币+1,VIP+0): 9-12 14:48
阳性克隆PCR得到结果不尽相同时做克隆长有的事情，对于PCR产物只有一条带的我一般都是挑5-6个阳性克隆，进行菌落PCR，如果多数克隆与目的条带大小差不多，就送出去测序，如果最初PCR产物不是一条带，克隆后一般都是多挑克隆进行鉴定，我有一次挑了20多个克隆才找到一个目的条带
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2楼2009-09-11 22:23:04
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
88196861(金币+1,VIP+0): 9-12 14:48
奇怪现象也是长有的事，只能多挑几个做鉴定了。我一般是挑10个鉴定。
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Thank-you，so-blue.
4楼2009-09-12 09:24:31
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
正常情况，多挑几个单克隆就可以解决
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5楼2009-09-12 22:14:47
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