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88196861

铜虫 (小有名气)

[交流] T载体的阳性转化子,pcr检测怎么大小不一样啊

我将pcr产物进行跑胶检测,对目的条带还进行了回收,然后与T载体连接,转化DH5a,挑取阳性克隆子进行pcr鉴定时,怎么么发现条带大小不同,并且有的和目的条带一样,有的却不同,那位能帮帮忙
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daisy8373

金虫 (正式写手)


88196861(金币+1,VIP+0): 9-12 14:49
可能是因为你的引物的特异性不够高,跟载体序列也能结合,最好提高TM值看看
生命中总有那么一段时光,充满不安,可是除了勇敢面对,我们别无选择。
3楼2009-09-12 09:03:22
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gastrodia

金虫 (正式写手)


88196861(金币+1,VIP+0): 9-12 14:48
阳性克隆PCR得到结果不尽相同时做克隆长有的事情,对于PCR产物只有一条带的我一般都是挑5-6个阳性克隆,进行菌落PCR,如果多数克隆与目的条带大小差不多,就送出去测序,如果最初PCR产物不是一条带,克隆后一般都是多挑克隆进行鉴定,我有一次挑了20多个克隆才找到一个目的条带
2楼2009-09-11 22:23:04
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


88196861(金币+1,VIP+0): 9-12 14:48
奇怪现象也是长有的事,只能多挑几个做鉴定了。我一般是挑10个鉴定。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-09-12 09:24:31
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
正常情况,多挑几个单克隆就可以解决
5楼2009-09-12 22:14:47
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