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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE电泳跑着跑着样品就会鼓起来 不知道为什么
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籽諾season

新虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE电泳跑着跑着样品就会鼓起来 不知道为什么

电泳每次到分离胶换了电压后样品就会鼓起来 跑出来的样品拖尾严重 不知道怎么办了 求求大神能解答一下

SDS-PAGE电泳跑着跑着样品就会鼓起来 不知道为什么


SDS-PAGE电泳跑着跑着样品就会鼓起来 不知道为什么-1


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1楼 2022-08-08 15:08:05
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SuYuo

铁虫 (小有名气)
你看一下跑的过程中夹板內的缓冲液面有没有下降，漏液了电流就不稳定，出现明显歪斜。

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

籽諾season
12
3楼2022-08-14 01:41:21
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SuYuo

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by SuYuo at 2022-08-14 01:41:21
你看一下跑的过程中夹板內的缓冲液面有没有下降，漏液了电流就不稳定，出现明显歪斜。

还有一个检验方法，看跑的时候电流大小，如果小于7mA就得检查一下。

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12
4楼2022-08-14 01:42:56
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SuYuo

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 籽諾season at 2022-08-14 10:02:24
没有下降 我每次都会一直看着那个液面
...

你的制样方法是怎样的？
加了蛋白上样buffer以后可以尝试95℃煮沸5min，然后12000rpm离心2-5min，取上清上样。
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12
6楼2022-08-14 22:55:15
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籽諾season

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by SuYuo at 2022-08-14 22:55:15
你的制样方法是怎样的？
加了蛋白上样buffer以后可以尝试95℃煮沸5min，然后12000rpm离心2-5min，取上清上样。...

我都是煮沸五分钟 然后瞬离

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7楼2022-08-15 21:32:13
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SuYuo

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 籽諾season at 2022-08-15 21:32:13
我都是煮沸五分钟 然后瞬离
...

样品来源是？
有的样品制样比较麻烦，制的不好就会跑的不清晰

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12
8楼2022-08-16 11:01:09
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籽諾season

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by SuYuo at 2022-08-16 11:01:09
样品来源是？
有的样品制样比较麻烦，制的不好就会跑的不清晰
...

样品是菌发酵液上清进行硫酸铵沉淀和离子交换层析后的样品

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9楼2022-08-16 11:49:53
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SuYuo

铁虫 (小有名气)
我没做过你的这种样品的跑胶。一点想法你参考下
电泳时候防止温度过高可以试试在电泳槽里面加冰袋
检查下电泳液的配方？我上个月电泳液甘氨酸浓度低了条带很歪。
我的配方是这个，供参考：
5x电泳缓冲液（2L）
称取Tris 30.25g、甘氨酸188g、SDS 10g，加入1.8L蒸馏水溶解完全，用浓盐酸调PH至8.5（pH一般不用调），然后用蒸馏水定容到2L，标记后室温保存。
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12
10楼2022-08-17 14:31:21
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普通回帖

高飞雄

新虫 (正式写手)
换个缓冲液试试
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2楼2022-08-11 14:20:48
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籽諾season

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by SuYuo at 2022-08-14 01:41:21
你看一下跑的过程中夹板內的缓冲液面有没有下降，漏液了电流就不稳定，出现明显歪斜。

没有下降 我每次都会一直看着那个液面

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5楼2022-08-14 10:02:24
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