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ZMQ68

新虫 (初入文坛)

[交流] EMSA!!! 已有5人参与

最近做EMSA，EB染色后DNA片段一直看不到。想请教有经验的前辈一些问题！！！！！

启动子必须加探针标记吗？？？很无知无助无力了。。我现在只用了纯化后的启动子片段跟蛋白孵育后跑Native-PAGE，用考马斯染蛋白有正确条带，很正常。
但是用EB染色20min紫外照胶却看不到DNA条带，不知道什么原因。是不是DNA浓度低，有没有做相关的实验，能否告知一下您的实验条件参考一下，，不胜感激！！！！！

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1楼 2022-08-04 17:04:15
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ZMQ68

新虫 (初入文坛)
感谢回帖!!

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6楼2022-08-05 15:59:17
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
（1） 探针的浓度够吗？ （单独跑探针染色能染上吗）
（2） 探针的大小（是否太大，没有进入分离胶；是否太小，已经跑出去了？）
（3） 探针与蛋白结合的条件是否有利于结合（镁离子是否必须，盐离子浓度超过100mM了吗？ 缓冲液的pH值是多少？）
（4） 在（3）的条件下，探针是否与蛋白结合（有实验证据吗）
（5） 是否有可能存在探针被降解的可能？
（6） 电泳过程是否大量产热，是否导致蛋白变性，或者复合物解离？
（7） 一步步做对照试验吧，一个实验不成功，很难说明哪(几)个步骤有问题

good luck~
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2022-08-04 17:43:41
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jinvijie

铁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也好奇启动子不标记是否可以检测出来

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找博导：硕士肿瘤药理学-分子生物学方向，六级已过，口语达到能表达自己，SCI二区。
3楼2022-08-05 00:24:08
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xuxinH

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
要加标记的探针吧

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4楼2022-08-05 00:57:56
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