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佳伦浪子

铁虫 (初入文坛)

[交流] 质粒转化大肠杆菌后的遗传稳定性怎么做啊!

大家帮帮忙,最近将一质粒转化进入了大肠杆菌中,需要对其遗传稳定性进行研究,貌似查不到怎么做的一些资料,大家能不能帮帮忙啊,怎么进行啊!

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 09:54 ]
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fushxmy

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
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350784478(金币+2,VIP+0):感谢参与 9-16 09:54
我想你应该是测试质粒在没有选择压力的情况下,是否会丢失吧。如果是的话,那就很好做了
1、从带有抗性的板子上接种一些大肠到LB不加抗性的medium中
2、培养一定的时间,分别取相同体积的大肠分别涂到带有抗性和没有抗性的平板上,数细菌的个数,看看差别是不是很大
3、第二步的同时,再从medium里取一些菌到新鲜的medium里面培养与上次相同的时间

2和3一直做下去,如果两个平板上的菌落数有显著性差异的时候,就说明这个质粒已经开始丢失了。

希望对你有帮助
秦皇汉武
2楼2009-09-14 22:16:55
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小猫三两只

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by fushxmy at 2009-9-14 22:16:
我想你应该是测试质粒在没有选择压力的情况下,是否会丢失吧。如果是的话,那就很好做了
1、从带有抗性的板子上接种一些大肠到LB不加抗性的medium中
2、培养一定的时间,分别取相同体积的大肠分别涂到带有抗性和 ...

是哪一种会比较少呢,做这个实验的目的是什么呢
3楼2009-09-14 22:23:24
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fushxmy

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
佳伦浪子(金币+9,VIP+0): 9-23 08:46
如果质粒丢失了,在有抗性的平板上长的比较少,实验的目的无非就是考察质粒的稳定性,看它能够保持多少代不丢失啊
秦皇汉武
4楼2009-09-14 22:25:14
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佳伦浪子

铁虫 (初入文坛)

谢谢大家的帮忙,特别是fushxmy 大虾!这样的话,就很麻烦了啊,还要天天计数!!!这些有没有根据啊,我就没有查到依据!!!谢谢各位了!!!大家帮帮忙!!!
5楼2009-09-15 10:38:35
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)


佳伦浪子(金币+1,VIP+0): 9-23 08:46
楼主说的是质粒的稳定性吧,fushxmy 说的是对的啊。有很多文章上就是这么做的,确实要计数的。如果你不想这样计数,就从LB平板上取100个菌落,点种在含抗生素的平板上,待长出后,计算长出的菌落数,除以100就是质粒的稳定性了
为梦想努力。
6楼2009-09-15 12:19:38
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