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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 请问96深孔板培养大肠杆菌表达蛋白和大体积的一样吗
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tevejdey

新虫 (小有名气)

[求助] 请问96深孔板培养大肠杆菌表达蛋白和大体积的一样吗 已有1人参与

请问培养体系应该多大？培养时间一样吗？如果进行诱导的话是培养多久会到指数生长期呢？具体操作可以说一下吗
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1楼 2022-08-03 14:44:44
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ap372767129

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不一样的。96孔板的小体系我没做过。正常都是250 mL三角瓶装50 mL培养基来发酵。同样比例放大到5 L三角瓶，表达量会降低。拿pET-28a表达载体来说，活化的菌液接入TB培养基后，先在37度下摇3 h，然后加入终浓度0.5 mM的IPTG，转入18-25度下继续发酵4-24 h。
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tevejdey
2楼2022-08-03 16:57:05
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sanlang_qq

铜虫 (著名写手)
完全不一样的，小体积大概率诱导不出来的

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然后呢
3楼2022-08-03 20:18:43
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tevejdey

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sanlang_qq at 2022-08-03 20:18:43
完全不一样的，小体积大概率诱导不出来的

请问是为什么啊？那高通量筛选表达效果是通过什么方法啊

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4楼2022-08-03 21:16:10
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tevejdey

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by ap372767129 at 2022-08-03 16:57:05
不一样的。96孔板的小体系我没做过。正常都是250 mL三角瓶装50 mL培养基来发酵。同样比例放大到5 L三角瓶，表达量会降低。拿pET-28a表达载体来说，活化的菌液接入TB培养基后，先在37度下摇3 h，然后加入终浓度0.5 m ...

好的谢谢

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5楼2022-08-03 21:17:54
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