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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 蛋白诱导表达问题
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zhaohai159

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白诱导表达问题 已有1人参与

所用酵母为一个酿酒酵母突变菌株，质粒为pYES2。转入酵母后蛋白诱导表达，为SD-URA培养基PH5.8加2%半乳糖，1%棉籽糖，250rpm30℃诱导表达，但经WB检测后，目的蛋白出不来，阳性对照可以出来。之前的师兄做的可以诱导出来。怎么优化诱导条件？
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1楼 2022-07-20 21:51:01
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期待的薛酱

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一是诱导条件不适合目的蛋白的表达，可通过改变培养基，温度，诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。
二是目的蛋白的菌种有问题，可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养，或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。
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食安专业/做分子/微生物/测序相关实验，现提供各种实验试剂耗材仪器和技术服务，私详聊
2楼2022-07-21 11:08:12
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zhaohai159

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 期待的薛酱 at 2022-07-21 11:08:12
一是诱导条件不适合目的蛋白的表达，可通过改变培养基，温度，诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。
二是目的蛋白的菌种有问题，可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养，或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。

好的，谢谢！
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3楼2022-07-21 20:57:49
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zhaohai159

新虫 (初入文坛)
已经解决，蛋白存在跨膜结构域，将这一结构去除后成功诱导表达出

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4楼2024-07-30 17:11:04
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