24小时热门版块排行榜    

查看: 1927  |  回复: 3
【悬赏金币】回答本帖问题,作者zhaohai159将赠送您 5 个金币

zhaohai159

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白诱导表达问题 已有1人参与

所用酵母为一个酿酒酵母突变菌株,质粒为pYES2。转入酵母后蛋白诱导表达,为SD-URA培养基PH5.8加2%半乳糖,1%棉籽糖,250rpm30℃诱导表达,但经WB检测后,目的蛋白出不来,阳性对照可以出来。之前的师兄做的可以诱导出来。怎么优化诱导条件?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

期待的薛酱

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。
二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。
食安专业/做分子/微生物/测序相关实验,现提供各种实验试剂耗材仪器和技术服务,私详聊
2楼2022-07-21 11:08:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohai159

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 期待的薛酱 at 2022-07-21 11:08:12
一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。
二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。

好的,谢谢!
3楼2022-07-21 20:57:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohai159

新虫 (初入文坛)

已经解决,蛋白存在跨膜结构域,将这一结构去除后成功诱导表达出

发自小木虫Android客户端
4楼2024-07-30 17:11:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaohai159 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 6/300 2026-11-06 09:03 by 2lRNluKrJpwL
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 20/1000 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:15 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:40 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 各位基础老师们,看完中央《从严治党》的决定后,对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
请填处理意见