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kidant

木虫 (正式写手)

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[交流] 【已解决】agilent二极管阵列检测器测样品不出峰

HPLC测苦参总生物碱遇到一个问题,色谱条件:氨基柱,乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(83:10:7),流速0.6ml/min,波长220nm,柱温20℃。
用1100+紫外检测器出的图不错,标准品在4‘、18’、27‘有3个峰,换到1200+DAD完全相同的条件,设的参比波长是360、450,结果除了开始的溶剂峰外始终没有峰出来,基本是在跑基线。以前没用过DAD,不知道是不是设置上有什么问题,但是感觉再怎么着也该出个峰啊,昨天刚开始做的时候流动相比例配错了,倒是在30’左右出了个大峰,今天上午跑到70‘出了个包,之后再做一直都是基线了。流速、柱温、进样量都调整试过,就是不出峰,问Agilent的工程师,按照他说的进行设置调整,结果还是一样,现在怀疑是不是柱子出问题了,请高手帮忙分析一下,另外谁有Agilent的DAD使用教材给发一个,学学怎么用,谢谢!

[ Last edited by kidant on 2009-9-13 at 17:16 ]
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hplc1019

银虫 (正式写手)


kidant(金币+1,VIP+0):肯定不会是这种低级错误了,谢谢帮忙。 9-10 18:13
你的样品 测过最大吸收波长吗  波长不对当然不出峰了
2楼2009-09-10 18:03:51
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kidant

木虫 (正式写手)

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方法没有问题,更不会是检测波长这种低级错误,已经在1100上做了很久,很稳定,现在时换成1200,检测器换由VWD换成DAD,其他没变。
3楼2009-09-10 18:18:38
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TMEDA

禁虫 (职业作家)

★ ★ ★
kidant(金币+3,VIP+0):谢谢帮忙,还要具体问一下,检测波长220的话参比设成多少合适? 9-11 08:35
本帖内容被屏蔽

4楼2009-09-10 19:16:00
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kidant

木虫 (正式写手)

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我这边没用过参比所以一下子设了4组,检测波长是220,参比设的256、360、450、360样品带宽都是4nm,参比带宽开始都用100nm后来改成4nm、4nm、4nm、100nm想看看是不是设置出的问题,结果还是没峰。试过柱温升到30℃,流速加大到1ml/min,进样量增大2倍、10倍还是不行。
5楼2009-09-11 08:40:13
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TMEDA

禁虫 (职业作家)

★ ★
kidant(金币+2,VIP+0):谢谢帮忙分析 9-11 13:03
本帖内容被屏蔽

6楼2009-09-11 08:50:44
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liuy_05

铁虫 (小有名气)


kidant(金币+1,VIP+0):谢谢帮忙,不是信号线的问题。 9-11 15:00
先在仪器调零看信号有没有变化,然后检查压力.可能你信号线是否有问题
7楼2009-09-11 10:24:35
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kidant

木虫 (正式写手)

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今天换了C18柱做别的样品,都是正常的,峰型也很漂亮,还是用的DAD检测器,这样看来机器应该没问题,是不是柱子有问题啊?这次也是第一次用氨基柱,按照这里找到的氨基柱使用方法进行处理的。
8楼2009-09-11 15:00:21
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nwxjh

荣誉版主 (文坛精英)

...退居二线...若隐若现...

优秀版主优秀版主优秀版主


kidant(金币+1,VIP+0):谢谢参与,机器正常,没有问题,现在怀疑是柱子的问题。 9-12 10:31
钨灯是不是坏了啊
心有所想,无所不为
9楼2009-09-11 20:07:52
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kidant

木虫 (正式写手)

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现在怀疑是柱子的问题,我是按照柱子说明书上的方法处理的,后来在这里看到氨基柱使用保养方法,又增加了用氯仿冲柱子,不知道氨基柱能不能用氯仿冲,是不是我把柱子冲塌了啊?
10楼2009-09-12 10:32:43
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