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739958571

铁虫 (初入文坛)

[求助] BSA封闭后,用pH=2的缓冲溶液清洗,会导致封闭失效吗?

在下做蛋白传感一类课题。比如在器件上修饰Anti-IgG去特异性检测IgG,用BSA进行的封闭防止非特异性结合。有几篇文献都有提到在一抗二抗特异性结合后,可以用pH=2的溶液清洗,可以使得Anti-IgG和IgG分离,这样可以重复测试,但是免疫蛋白和封闭用的BSA不会因为这样的清洗而变性失活吗?小弟非生物相关专业,望指教,多谢。
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)

ph2的缓冲液,确实是可以把抗体洗掉的,条件需要摸。但是需要重新封闭。

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2楼2022-07-05 16:15:56
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739958571

铁虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2022-07-05 16:15:56
ph2的缓冲液,确实是可以把抗体洗掉的,条件需要摸。但是需要重新封闭。

谢谢您的回复,还想请教您,我查到一抗二抗特异性结合靠的是静电引力、范德华力、氢键结合力和疏水作用力。在较大或较小的pH条件下会破坏两者间静电力,降低了结合力,进而发生解离。这个不确定是否正确,想请教一下。而且还有是为什么BSA在pH=2的环境下会失活需要重新封闭,而抗体蛋白就不会失活呢?
3楼2022-07-06 13:17:48
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 739958571 at 2022-07-06 13:17:48
谢谢您的回复,还想请教您,我查到一抗二抗特异性结合靠的是静电引力、范德华力、氢键结合力和疏水作用力。在较大或较小的pH条件下会破坏两者间静电力,降低了结合力,进而发生解离。这个不确定是否正确,想请教一 ...

纯生物角度,一般没人考虑那么多作用力,只要species对上就好了。生物物理这款,你测个ITC,看一下结合的亲和咋样。

发自小木虫Android客户端
4楼2022-07-06 15:56:05
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