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求大佬解惑！！为什么我用CRSPR/Cas系统无法敲除沙门氏菌中的目的基因！！
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本人使用中科院杨晟老师开发的基于CRSPR/Cas9d的pCas/pTargetT基因敲除系统，我的目的菌株是沙门氏菌。 上半年我已经使用该系统对目的菌株的一个基因成功进行敲除。但是最近在敲除另外一个基因的时候，更换了非常多的gRNA都无法敲除。我有下面几个疑问，希望有大佬能够解惑，感激不尽！ 1、我要敲除的片段是370bp左右。会不会是因为片段太短，所以导致无法敲除成功。 2、我要敲除的基因是参考别人文献中的。别人的文献是用了自杀质粒，对目的基因进行同源重组，进行的基因敲除。我使用的Donor就是参考的文献中的。我想问一下，是不是有些基因使用CRSPR就是敲除不了，得换其他方法才能敲掉？ |
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