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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蛋白纯化以及标签的添加
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gqc1102

新虫 (小有名气)

[交流] 蛋白纯化以及标签的添加

目前正在做蛋白纯化，质粒用的是pET28a，由于该质粒自带His-tag，所以重组质粒构建成功后，表达出来的蛋白不管是杂蛋白还是目的蛋白，几乎全部带着His-tag，用Ni柱进行蛋白纯化后，得到低浓度的目的蛋白，SDS-PAGE显示没有杂蛋白，但只要将蛋白浓缩后，就可以看到杂蛋白，所以没办法得到纯度高且浓度也高的目的蛋白。于是想将插入的片段的一端加入StrepⅡ，但是又担心会不会表达出来的蛋白全部又带有StrepⅡ标签，会不会又无法得到高纯度的、高浓度的目的蛋白。有没有哪位道友做过相似的实验，StrepⅡ标签应该如何添加才能一步纯化蛋白。求交流、求指教。
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1楼 2022-06-30 21:32:37
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蛋白大小多少，可以让溶液通过分液的机子，取出峰正确的一段。

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2楼2022-06-30 21:36:19
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gqc1102

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2022-06-30 21:36:19
蛋白大小多少，可以让溶液通过分液的机子，取出峰正确的一段。

谢谢回复

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3楼2022-07-04 13:53:35
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