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蛋白纯化以及标签的添加
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| 目前正在做蛋白纯化，质粒用的是pET28a，由于该质粒自带His-tag，所以重组质粒构建成功后，表达出来的蛋白不管是杂蛋白还是目的蛋白，几乎全部带着His-tag，用Ni柱进行蛋白纯化后，得到低浓度的目的蛋白，SDS-PAGE显示没有杂蛋白，但只要将蛋白浓缩后，就可以看到杂蛋白，所以没办法得到纯度高且浓度也高的目的蛋白。于是想将插入的片段的一端加入StrepⅡ，但是又担心会不会表达出来的蛋白全部又带有StrepⅡ标签，会不会又无法得到高纯度的、高浓度的目的蛋白。有没有哪位道友做过相似的实验，StrepⅡ标签应该如何添加才能一步纯化蛋白。求交流、求指教。 |
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