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裸鼠皮下荷瘤步骤
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研究中广泛使用的是人源肿瘤细胞系异种移植，是将体外传代培养的人源肿瘤细胞接种到免疫缺陷的小鼠上观察肿瘤的生长，用来研究肿瘤细胞增殖或进行体内药物筛选实验的模型。 由于裸鼠的免疫缺陷，在一定情况下，不排斥来自异种动物的组织移植。因此成为移植人类肿瘤的接受体。接下来，为大家详细介绍裸鼠皮下荷瘤步骤： 1、细胞准备 ⑴肿瘤细胞的传代扩增 取冻存于液氮的肿瘤细胞复苏并扩增，确保肿瘤细胞的活力和良好的生长状态。首先，从液氮罐里取出冻存的细胞株，进行细胞复苏，复苏后的细胞会渐渐恢复活力、迅速增殖。当贴壁生长的细胞覆盖了培养皿底面的80%以上时，就要进行细胞的传代培养，传代会给细胞提供更多的生长空间和足够的营养物质。 ⑵计算细胞接种量 提前计算确定细胞数量，一般注射40只小鼠，至少需要准备50只小鼠的细胞量。 2、裸鼠准备 一般选择5-6周裸鼠（体重18-20g左右），小于4周动物可能不耐受而过早死亡，大于6周免疫力会增强，不易成瘤。同批实验鼠要保证个体差异小。 3、操作步骤 ①当细胞生长到我们需要的数量时，就可以进行收集，胰酶消化收集细胞，计数后并调整到合适的浓度（PBS或者无血清培养基稀释细胞，若不易成瘤可添加matrigel促进成瘤）。 ②接种时选择好部位进针，建议接种前用75％酒精棉球擦拭消毒进针位置。 ③针头在皮下走一段再注射，速度不可太快，一般体积为100-200μL，可看见明显的鼓包。 ④注射完毕后，缓慢旋转拔出注射器，然后将小鼠放回笼内继续饲养，大概1周后可看到肿瘤出现。一般当小鼠皮下长出约绿豆大小的肿瘤块时，我们便可每隔2-3天进行肿瘤体积的测量，动态反应药物的抗肿瘤效果。根据实验设计时间处死小鼠，取肿瘤，拍照。 |
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