24小时热门版块排行榜    

查看: 668  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhang6871

银虫 (正式写手)

[交流] PCR问题求助?

在设计引物预作PCR时,如果目的基因的mRNA长3000bp,那么设计引物的时候使扩增片段位于什么区间有没有什么不同呢?比如,位于1-1000bp间,1000-2000bp间,2000-3000bp间,扩增的效果会不会有什么大的区别呢?恳请有经验的虫友解答一下。谢谢!
回复此楼
过于功利,浮躁,布满灰尘的心都是创新的杀手!多记,心静,多动手,贴近大自然!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木木803

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物设计一般依照引物退火温度,产物退火温度,还有引物结构,有没有二聚体等条件,建议你用一些软件如Oligo,Primer Premier等来设计
3楼2009-09-10 11:39:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

zhouhuaxi

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
肯定是有区别的,3000BP的片段,一定会有二级结构的。如果你刚好设计在二级结构上的话,退火温度肯定要高一些。还有就是取决于你的逆转引物是什么,OLIGODT是从POLYA开始的,可能会由于二级结构的阻碍导致逆转不彻底,那么设计在上游例如1-500范围内,有可能扩增不成功。
4楼2009-09-10 16:08:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxx41

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个肯定是有区别的啊,但是有多大就不好说了。楼上二位说的挺好啊,你完全可以摸索一下啊
内事不决问百度,外事不决问Google,横批:wikipedia
5楼2009-09-10 19:01:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangxiaofei


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议1 不要设计在5‘或者3'端,因为在这两段往往涉及RNA Processing°radation的特殊结构,设计在这些位点可能会造成PCR不成功,偏中间的序列往往比较保险,建议在各个区段各设计一对,看哪对能P出来。3K也不是很长,不会特别难做。
6楼2009-09-10 22:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +24 医学老男孩 2026-08-13 50/2500 2026-08-15 06:38 by 学员8dgXkO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见