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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 请问大家动物的线粒体基因组是怎么提取测序的？
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石辰风

铁虫 (小有名气)

[求助] 请问大家动物的线粒体基因组是怎么提取测序的？已有2人参与

是提取出总DNA然后用很多引物一段段扩增后测序组装还是说有专门的线粒体基因组提取的试剂盒可以直接提取出来线粒体然后测序？
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1楼2022-06-08 13:41:51
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石辰风

铁虫 (小有名气)
现在的理解是不是扩增出动物线粒体基因组上的几个片段，比如说COI、nad4等，然后再根据它们的序列设计引物收尾相连，组成一个circle得到线粒体基因组？
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2楼2022-06-08 14:22:21
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石辰风

铁虫 (小有名气)
我的这个线粒体基因组是14kb左右，是不是可以扩增出COI序列，然后根据COI序列的首尾设计引物，用PCR长扩增试剂盒扩增其余的环状序列，然后用超声打碎扩增产物，进行末端修复，然后纯化，再在表达载体上克隆，最后菌落测序获得序列，再进行组装、注释？
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3楼2022-06-08 14:58:35
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W_YinShi

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 应助指数-1 2022-07-05 09:07:24
渊博震天: 金币+20, 鼓励进行高质量回帖 2022-07-05 09:08:21
测序公司，低温送生物样品或DNA样品，二代测序，自己组装注释或者公司组装注释，时间周期长，价格较高

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4楼2022-06-08 20:01:39
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石辰风

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by W_YinShi at 2022-06-08 20:01:39
测序公司，低温送生物样品或DNA样品，二代测序，自己组装注释或者公司组装注释，时间周期长，价格较高

我看论文里都没写此部分送XXX公司完成，以为是在最后一步把mtDNA送去测序的，晚上查了一下发现好像只要提取出DNA送到公司他们就可以提取组装注释好了对吧？不知道一个样品大概多少钱？14kb左右的mtDNA
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5楼2022-06-09 09:31:13
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 石辰风 at 2022-06-08 14:22:21
现在的理解是不是扩增出动物线粒体基因组上的几个片段，比如说COI、nad4等，然后再根据它们的序列设计引物收尾相连，组成一个circle得到线粒体基因组？

我以前这么测的，找相近物种，设计若干对引物，测序，拼接
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核酸提取与Taqman诊断
6楼2022-06-30 08:43:00
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石辰风

铁虫 (小有名气)
现在知道了，线粒体和叶绿体不是单独提取出来测序的，是用二代测序的技术测基因组DNA，通过组装注释得到的。以前我不理解二代测序与sanger测序，以为测序都需要引物扩增，但是二代测序的技术是把基因组打断成小片段再组装，由于线粒体与叶绿体在动植物体内拷贝数比较多，所以直接组装比较容易得到
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7楼2022-07-18 10:28:15
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 石辰风 at 2022-07-18 10:28:15
现在知道了，线粒体和叶绿体不是单独提取出来测序的，是用二代测序的技术测基因组DNA，通过组装注释得到的。以前我不理解二代测序与sanger测序，以为测序都需要引物扩增，但是二代测序的技术是把基因组打断成小片段 ...

sanger测也不难，线粒体、叶绿体都是环状
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核酸提取与Taqman诊断
8楼2022-08-09 15:53:08
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