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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » α-葡萄糖苷酶救命
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chen33895

铜虫 (小有名气)

[求助] α-葡萄糖苷酶救命

乙醇洗脱物，在水中不能完全溶解，之前用乙醇溶解，但乙醇本身对酶有影响，所以还是用水溶解当混悬液用。
操作步骤为：96孔板上加110μLpbs，20μl葡萄糖苷酶，10μl样品和10μl还原性谷胱甘肽，37度反应15min，然后加pnpg，再反应15分钟，然后加入80μl碳酸钠终止反应。一天做了12次，每次6个浓度梯度的抑制率要么其中大于1，要么就不成比例，同一个质量浓度抑制率10-20波动。样品用的都是一样的，放冰箱保存。
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1楼 2022-06-02 21:42:42
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chen33895

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 叭叭2 at 2022-07-01 10:03:42
你好，我现在也遇到了相同的问题，可以加个联系方式一起交流吗...

我最后加大了样品的浓度梯度和增大pnpg的量，然后解决了。另外有一个可能就是，我的是混悬液，然后吸的时候，样品空白把颗粒吸上去了，导致吸光度变大，样品组-样品空白组就是一个负数了
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4楼2022-07-01 14:44:44
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chen33895

铜虫 (小有名气)
帮自己顶一下
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2楼2022-06-03 14:30:42
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叭叭2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chen33895 at 2022-06-03 14:30:42
帮自己顶一下

你好，我现在也遇到了相同的问题，可以加个联系方式一起交流吗
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3楼2022-07-01 10:03:42
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xiaoyinger

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chen33895 at 2022-07-01 14:44:44
我最后加大了样品的浓度梯度和增大pnpg的量，然后解决了。另外有一个可能就是，我的是混悬液，然后吸的时候，样品空白把颗粒吸上去了，导致吸光度变大，样品组-样品空白组就是一个负数了...

你们的酶和pnpg浓度时多少呀？我做出来一直不显色
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5楼2022-07-08 01:04:51
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杨可可可可

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 叭叭2 at 2022-07-01 10:03:42
你好，我现在也遇到了相同的问题，可以加个联系方式一起交流吗...

我也是，做了好多遍了，数据不理想。数据都是0.05左右

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6楼2022-07-08 10:35:23
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chen33895

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaoyinger at 2022-07-08 01:04:51
你们的酶和pnpg浓度时多少呀？我做出来一直不显色...

酶用的是2U，pnpg是2.5mmol
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7楼2022-07-09 10:11:30
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chen33895

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 杨可可可可 at 2022-07-08 10:35:23
我也是，做了好多遍了，数据不理想。数据都是0.05左右
...

这个很不稳定，我做了有50-60遍，还有就是我的样品水溶性不怎么好，过一下滤膜之类的，然后不行的话 就把样品浓度加大
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8楼2022-07-09 10:12:41
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杨可可可可

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by chen33895 at 2022-07-09 10:12:41
这个很不稳定，我做了有50-60遍，还有就是我的样品水溶性不怎么好，过一下滤膜之类的，然后不行的话 就把样品浓度加大...

可以加一下联系方式嘛

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9楼2022-07-12 19:00:25
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叭叭2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 杨可可可可 at 2022-07-12 19:00:25
可以加一下联系方式嘛
...

你好，我也是做的葡萄糖苷酶活性实验，遇到和你一样的情况，可以加你联系方式交流交流吗
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10楼2022-09-27 11:17:58
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