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huij007

铜虫 (小有名气)

[交流] 如何设计3‘和5’RACE的引物?

最近老板让做race,无奈啥也不懂,也不知道末端引物应该怎么设计?是不是通用引物呀?请高手虫子指点!
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小白3521

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们用的是takara的试剂盒,也还可以
就是根据你的已知序列分别设计两条特异引物,3‘是设计两条上游引物,5’设计的两条下游引物,一般来说,GC的比要比较高,碱基数也有要求范围,每个试剂盒的说明书应该有会写明适合该试剂盒的引物设计,lz好好看说明吧
6楼2009-11-11 08:57:51
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)


huij007(金币+1):谢谢参与
我们都用试剂盒。
砖石王老三!!!
2楼2009-09-08 21:05:21
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


huij007(金币+1):谢谢参与
试剂盒能够快一点,当然你也可以自己按试剂盒配比分别单买试剂。现在smart race 比较流行,你可以试一试,而且价格也不是那么贵;忘了说了,不用你设计引物,但是如果你要是有你全长序列中的一段序列已知的话就更好了,操作会容易一些。

[ Last edited by sutao1979 on 2009-9-8 at 21:11 ]
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-09-08 21:10:07
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gastrodia

金虫 (正式写手)

和正常的引物设计一样,关键是Tm要高,提高扩增的特异性,如果你什么基础都没有的话,建议把invitrogen和Clontech的RACE kit说明书看一下
4楼2009-09-09 10:08:11
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