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巨噬细胞raw 264.7给药问题
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我需要把细胞种96孔板养24h后，再给药24，但是我现在发现只给溶剂都会让我的细胞状态变很差。 溶剂是7.5微升TAE/Mg 2+（40 mM Tris base (pH 8.0), 20 mM acetic acid, 2 mM EDTA, and 12.5 mM magnesium acetate），然后加空白培养基稀释到100微升 整个实验过程：用到的所有溶液都会在37度预热 1.细胞15000个/孔种96孔板，培养基是10%FBS完全培养基，培养24h; 2.24h后弃掉70微升培养基，然后加200微的空白培养基，再弃去200微的孔内溶液，反复洗三次，最后孔内剩了30微空白培养基（这样做是因为之前做实验换液吸干pbs清洗的时候，发现细胞总会飘起来很多，我以为是换液的时候导致细胞脱落等让我的实验出现问题，就改成了这种方法去除掉旧培养基，细胞在清洗给药过程虽然不飘了，但是发现给溶剂后细胞还是不行）； 3.空白孔加70的空白培养基；溶剂组加70微的稀释了药物的空白培养基，最终孔内100微，药物溶液含7.5微，需要给药24h。 4h之后我去观察了一下，细胞还是很好的，很正常。到第二天我再来看就不行了，空白组和溶剂组差得很明显。没有观察到明显的飘起来的细胞，这个溶剂别人也用过，正常来说不应该出现这种情况，如果溶剂都有这么明显的不正常情况，那我后面再做给药的结果也不可靠。我现在唯一能猜测到的是7.5微体积太大了，影响了它的生长，但是空白培养基细胞就长得很好啊（ㄒoㄒ） 想请各位大佬指教一下，我已经卡在这很久很久了 感激不尽！ @youlinglyw@biostar2009 |
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