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anik

银虫 (正式写手)

[交流] 求教

有谁做过去磷酸化？
质粒单酶切后是回收之后再做去磷酸化，还是直接加CIAP进行去磷酸化？
磷酸化反应完后是否需要回收再做连接？
谢谢。。。
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1楼 2009-09-08 18:23:50
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anik

银虫 (正式写手)
没人回答么？
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2楼2009-09-08 20:30:48
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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sutao1979(金币+2,VIP+0):谢谢参与 9-8 21:37
酶切后磷酸化，然后加蛋白酶K、EDTA、SDS酶解CIP，最后再纯化。
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砖石王老三！！！
3楼2009-09-08 20:46:05
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anik

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jack6335 at 2009-9-8 20:46:
酶切后磷酸化，然后加蛋白酶K、EDTA、SDS酶解CIP，最后再纯化。

酶切后是回收之后再磷酸化，还是直接磷酸化？
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4楼2009-09-09 11:02:19
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xmchen1015

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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350784478(金币+2,VIP+0):谢谢回答 9-9 15:39
两种都可以，如果直接磷酸化，可在酶切反应的最后30分钟加磷酸酶，但一定保证磷酸酶在酶化反应buffer中有活性。
也可在纯化后加磷酸酶，反应完后可以直接高温失活，不用再纯化就可以做连接。
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5楼2009-09-09 12:41:06
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