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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 测序
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者爱吃排骨199将赠送您 10 个金币

爱吃排骨199

铁虫 (小有名气)

[求助] 测序 已有2人参与

请问质粒浓度大于200，送测序，经常显示样品浓度低怎么回事？4条引物只有1条测序成功，说明模板可以用来测序对吧。其余显示无信号或信号极弱。测序公司说可能有复杂结构或者高gc含量，所以我让他们帮忙设计引物，但是也要两三次才成功。一般测序也没问题，不拿到结果也不敢往下做啊。着急，时间都耗在构建载体上了。有知道的朋友帮忙解答下嘛？谢谢。

@youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2022-05-05 20:41:49
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
送测序显示样品浓度低是你把样本寄过去测序公司还要测一次浓度，他们测得低就低咯。如果是有结构那么测序结果应该是信号正常到减弱或者正常到套峰，结构和高gc你自己看序列就能看出来吧，自己不会核对一次看有没有这种情况吗
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2楼2022-05-06 11:03:55
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我上诉发言有个地方错了，就是浓度低不是你的质粒浓度低，而是sanger测序它中间有一步扩增，得到的测序片段浓度低。可能是测序公司说的高gc导致的扩增量少，可以上机的时候加大电压测序，但是测序公司一般测的话是搭着测不会为了你一个人去更改仪器的程序，除非你的量足够大并且和测序公司沟通好这些东西
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3楼2022-05-06 11:13:27
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shuaibia6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-05-06 11:13:27
我上诉发言有个地方错了，就是浓度低不是你的质粒浓度低，而是sanger测序它中间有一步扩增，得到的测序片段浓度低。可能是测序公司说的高gc导致的扩增量少，可以上机的时候加大电压测序，但是测序公司一般测的话是搭 ...

我想了一下这个浓度低还是样本浓度低，一般应该不会测扩增片段浓度，你可以和那边沟通是哪个浓度低。上面这一整段就不必看了
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4楼2022-05-06 11:19:57
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AD_com

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
送个菌液继续测序
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5楼2022-05-06 17:27:46
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爱吃排骨199

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-05-06 11:19:57
我想了一下这个浓度低还是样本浓度低，一般应该不会测扩增片段浓度，你可以和那边沟通是哪个浓度低。上面这一整段就不必看了...

对，就是样本浓度低，菌p大小正确，刚收到测序无信号，这也太难了。。

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6楼2022-05-07 09:45:02
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爱吃排骨199

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by AD_com at 2022-05-06 17:27:46
送个菌液继续测序

送了，他们提质粒也显示样品浓度低。

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7楼2022-05-07 09:48:05
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ybzberlin

新虫 (初入文坛)
我之前也遇到过 他们自己设计的引物 也老是出现测序无信号 但是多测几次信号又有了 可能是他们公司换新人了 哈哈哈哈

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8楼2022-05-07 19:40:48
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