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15230747667

新虫 (小有名气)

[求助] 最近构建载体真的一直出问题

最近在构建一个载体,基因长度大概是3000左右,然后载体有两个一个6000,一个10000,最近按照平时构建载体的方法,怎么也构建不上,酶切已经试验了好几次了,基因也p了很多次,引物都换了好几次,可依旧构建不上,到底是为什么啊

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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

不知道具体是怎么连接的。建议目的片段TA克隆到T载,测序正确后备用。目标载体的话考虑问课题其它同学要新的,重新摇菌提质粒。回收片段后,后续的连接最好大概换算一下片段比例。还有就是自己做的同时,也请同门帮忙试一下,也许会有所好转!

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特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
2楼2022-05-04 21:24:01
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ybzberlin

新虫 (初入文坛)

换个酶切位点试一下。同源重组试过吗?片段回收试剂盒过期没有?回收浓度有多少?可以试试最新的。感受态效率怎么样?

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3楼2022-05-04 21:24:16
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