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新虫 (小有名气)

[求助] 最近构建载体真的一直出问题

最近在构建一个载体，基因长度大概是3000左右，然后载体有两个一个6000，一个10000，最近按照平时构建载体的方法，怎么也构建不上，酶切已经试验了好几次了，基因也p了很多次，引物都换了好几次，可依旧构建不上，到底是为什么啊

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1楼 2022-05-04 21:01:19

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至尊木虫 (知名作家)

不良人

不知道具体是怎么连接的。建议目的片段TA克隆到T载，测序正确后备用。目标载体的话考虑问课题其它同学要新的，重新摇菌提质粒。回收片段后，后续的连接最好大概换算一下片段比例。还有就是自己做的同时，也请同门帮忙试一下，也许会有所好转！

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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！

2楼2022-05-04 21:24:01

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新虫 (初入文坛)

换个酶切位点试一下。同源重组试过吗？片段回收试剂盒过期没有？回收浓度有多少？可以试试最新的。感受态效率怎么样？

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3楼2022-05-04 21:24:16

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