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追逐梦想

银虫 (小有名气)

[交流] PCR

请问大家：
      在模板，引物条件没有问题的前提下，如何更好的扩出目的条带呢?听说有的加DMSO有效！
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追逐梦想！
1楼 2009-09-08 09:40:39
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yihx2006

银虫 (小有名气)
这个很难说,因素太多了,还是靠自己多摸索几次吧
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2楼2009-09-08 09:52:58
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银杏下

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 9-8 11:46
如果正常情况下可以扩曾出来就不需要考虑这些外加因素，这外加因素促进作用不明显，一般是正常情况下扩增不出的时候才会考虑加DMSO等条件来促进引物与模板结合。
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3楼2009-09-08 10:04:02
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
能扩出来就行了，做克隆的话一点点就足够了
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4楼2009-09-08 10:56:45
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小瞥

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 9-8 11:46
DMSO的效果主要针对模板DNA很差的情况，其他不一定适用。还是要具体分析的
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5楼2009-09-08 11:21:58
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
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DMSO主要是针对gc含量较高的模板，一般的来说，只要你扩增不超过4kb用普通的taq polymerase就足够了，否则用高保真的酶操作
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会当凌绝顶，一览众山小
6楼2009-09-08 21:49:30
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
PCR的可以调控的重要参数好像还有Tm值吧，好像优化时很多是设计它的梯度。
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7楼2009-09-09 09:44:05
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yxx41

金虫 (小有名气)
★
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DMSO、BSA之类的先不要用，可以先从Mg离子浓度啊、退火温度之类的入手啊
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内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
8楼2009-09-09 11:50:47
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caiseas

木虫 (小有名气)

中级剑士
★
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循环次数，退火温度，都影响到扩增的效果先考虑这些因素，如果模板没有高GC含量就不要加DMSO.
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9楼2009-09-09 12:03:33
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